JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Цель этого исследования – оценить ли suprachoroidal трансплантат жировой производные стволовых клеток, включены в стромальные сосудистой фракции и тромбоцитов, производный от тромбоцитов богатые плазмы методом восстановления сетчатки Limoli может улучшить остроты и чувствительности сетчатки ответы в глазах пострадавших от сухие возраста макулярной дегенерации.

Аннотация

Это исследование направлено на изучение ли suprachoroidal трансплантат аутологичных клеток может улучшить лучших исправлен остроты зрения (BCVA) и ответы на microperimetry (мои) в глазах пострадавших от сухой возрастной макулярной дегенерации (AMD) со временем через производство и секрецию факторов роста (GFs) на окружающие ткани. Пациентов были рандомизированы для каждой исследовательской группы. Все пациенты были диагностированы с сухой AMD и BCVA равным или больше чем 1 логарифм минимального угла резолюции (logMAR). Аутологичные трансплантата suprachoroidal Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) была проведена на группу, которая включала 11 глаз от 11 больных. Техника была выполнена путем имплантации адипоциты, жировой, полученных стволовых клеток, полученных из стромы сосудистой фракцию и тромбоцитов из тромбоцитов богатые плазмы в suprachoroidal пространстве. И наоборот Группа B, включая 14 глаза 14 пациентов, была использована как в контрольной группе. Для каждого пациента диагноз был verified by конфокальный сканирующий лазер офтальмоскоп и спектральные домена оптическая когерентная томография (SD-Октябрь). В группе А, BCVA способствовало 0.581 для 0,504 на 90 дней и 0,376 logMAR на 180 дней (+32.20%) после операции. Кроме того, мой тест увеличилась 11,44 дБ до 12,59 дБ на 180 дней. Различных типов клеток привитые позади сосудистое смогли обеспечить постоянное GF секреции в потоке хориоидеи. Следовательно, результаты показывают, что визуальные остроты (VA) в группе привитых может увеличить более чем в контрольной группе после шести месяцев.

Введение

Клеточная терапия, состоящий из системного или местные инъекции стволовых/прогениторных клеток в поврежденной области для лечения несколько хронических расстройств, привлекла пристальное внимание в последние десятилетия1. С 1990 года были изучены факторы роста (GFs) для их потенциально терапевтическую роль в атрофии сетчатки2. В самом деле многие человеческие клетки могут производить GFs, которые являются специфические белки, которые могут блокировать или замедлить апоптоза, т.е., запрограммированной смерти клеток3.

Известно, что сухие возраста макулярной дегенерации (AMD) является заболевание атрофический сетчатки, где постепенный и необратимый клеточной смерти включает травмы фоторецепторных слой и, следовательно, потери Центральной зрительной функции4. AMD является ведущей причиной слепоты среди людей старше 55 лет в развитых странах и приходится 80% всех макулярной дегенерации, которых не хватает эффективного лечения на сегодняшний день.

Несколько исследований показали, что существуют различные источники, из которых могут быть получены аутологичной СГФ. Они включают различных типов клеток, включая жировой стромальные клетки, полученные из орбитальной жира, тромбоцитов, полученных от богатых тромбоцитов плазмы (PRP) и жировая производные стволовых клеток (ADSCs) включены в стромальные сосудистой фракции (СФДВ) жировой ткани5 6, ,7. Текущий набор GF обеспечивает сетчатки neuroenhancement и исследования, проведенные Филатов, Meduri, Пелаэс, и Limoli показал, что аутологичной трансплантации жира (AFT) является эффективным8,9,10.

Кроме того предварительное исследование показало значительное улучшение в сравнительно (ЭРГ) данных, записал пост suprachoroidal аутологичные трансплантата, сухого глаза, пострадавших от AMD11. Хирургически привитые ткани в suprachoroidal пространстве модулированные паракринными секрецию клеток сетчатки, задерживая их апоптоз6,7,12. Учитывая Толщина внешнего слоя ядерных гистологическое исследование сетчатки морских свинок показал, что СГФ может иметь трофический эффект на сетчатке. Таким образом прямое или косвенное использование СГФ потенциально может принести терапевтические преимущества посредством сбалансированного отношения между молекулярной индукторов и ингибиторы6,7,12.

Этот метод предназначен, оценить ли suprachoroidal трансплантат адипоциты, ADSCs в НВФ и ОТР может улучшить лучших исправлен остроты зрения (BCVA) и microperimetry (MY) ответы в сухих глаз, пострадавших от AMD. Это исследование призвана продемонстрировать терапевтический эффект аутотрансплантатом на основе его GF производства, по данным литературы6,7,12,13.

протокол

Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике Low Vision Академии и все предметы подписали письменное согласие в соответствии с Хельсинкской декларации. Это исследование получил этическое одобрение от Лоуборо и Шеффилд университетов.

Примечание: Критерии включения и исключения сухие возраста макулярной дегенерации пациентов получать suprachoroidal аутологичные трансплантата Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) описаны в таблице 1.

1. Диагностика сухие возраста макулярной дегенерации пациентов

  1. Установите диагноз с конфокальный сканирующий лазер офтальмоскоп, SD-OCT и MY.
  2. Оценку каждой группы BCVA для дальнего и Ближнего расстояния. Мера ва вблизи видения (крупный план) в точках (Pts). Измерения BCVA в момент времени 0 (T0), 90 (T90), и 180 дней (T180) по сравнению с раннего лечения диабетической ретинопатии исследование диаграмм (EDTRS) на 4 метра в logMAR.
  3. Запись электрической scotopic, Сумеречное и фотопического клеточной активности или флэш-Эрг, согласно стандартов, установленных в 2009 году Международного общества клинической электрофизиологии видения (ISCEV)11.

2. анестезии

Примечание: Золотой стандарт в анестезии во время LRRT является местной анестезией, подкрепляется суб шип инфильтрации анестезии и седации. В конкретных случаях общей анестезии является предпочтительным.

  1. Получить роговицы и конъюнктивы анестезии, применяя актуальные местных анестетиков привили прикапывают 15-20 мин до операции с лидокаина на 4% и ропивакаина в 1%.
  2. Привнести анестезии, проникновение непосредственно в суб конъюнктивы и subtenon запрещено.
  3. Используйте местные инфильтрата в брюшной области, прежде чем добывается жировой ткани и в суб конъюнктивы и суб шип пространств, 12 мм от лимба. Принять местной анестезии carbocaine или Маркаин, смешанного с 1200 МЕ адреналина.
  4. Обеспечивают интраоперационной седации через анестетик, который может выполняться должным образом с помощью фентанила как наркотическое болеутоляющее через повторные небольшие боли. Доза обычно 0,025 мг фентанила с 1 мг мидазолама за болюса.

3. Limoli сетчатки восстановление техника подготовки

Примечание: Этот метод представляет собой вариант Пелаэс вмешательства, в которой орбитальный собственного жира трансплантированы в пространстве7,1,6,subscleral12. Хирургически привитые клетки могут производить много СГФ с нейротрофическими и angiotrophic свойства в окружающие ткани, сосудистой оболочки и сетчатки18,19,20,21,22 ,23,24,25. В LRRT расстояние между привитые аутологичные клетки и сосудистое уменьшается с помощью глубокая склерэктомия, и площадь контакта между стебля и сосудистое расширяется для содействия паракринными аутологичных клеток секрецию хориоидеи потока9, 10,14.

  1. Выполняйте надлежащее лечение каждого глаза перед операцией с клеточной трансплантации между сосудистое и склера, процедура называется Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT)15,16,17.
  2. Графт ADSCs, полученные Колман et al. и Лоуренса техника (рис. 1) от брюшной жир, в СФДВ в sovrachoroidal пространстве15,16,17.
  3. Инфильтрат жировой ножке с тромбоцитов, производный от PRP гель, полученные через следующие шаги.
  4. Центрифуга крови6,12 и собирать тромбоцитов богатые плазмы (PRP). Стимулом для тромбоцитов дегрануляции вызывает GF релиз в жировой ножке6,12.

4. Технические спецификации и стратегия

Примечание: Жировой ткани собираются и очищаются от брюшной подкожного слоя пациентов, согласно Лоуренс и Колман техника17(Таблица материалов).

  1. Вручную урожай 10 мл жировой ткани из брюшной подкожного слоя каждого пациента, с использованием 3-мм тупой канюлей подключен к блокировки шприц, Лоуренс и Колман техника17 (цифры 2A/2B).
  2. Отделить чистый СФДВ жировой ткани от крови, жира, масла и жидкости центрифугированием на 5 мин на 1500 x g при 20 ° C (рис. 2C). СФДВ имеет очень богатые ADSCs17.
  3. Собирайте 8 мл периферической крови человека с иглой 22 G и в отдельные трубки для подготовки ОТР.
  4. Центрифуга собранной крови за 5 мин на 1500 x g при 20 ° C (рис. 2D). В LRRT, последующие изменения результат лучше выживания аутологичной жировой трансплантат, ADSC распространения, которая способствует увеличению хориоидеи перфузии, и более всеобъемлющего модуляции действие этих факторов, которые являются только выделяемый жировой7, 11,17.
  5. Построить suprachoroidal карманные (более подробная информация на шаге 4, в частности 4.4 и 4.5) для размещения трансплантата, полученные из орбитальной жира и насыщают остаточный объем этого карман со смесью ADSCs из SVF и ОТР, полученные согласно Лоуренс и Колман техника17.

5. Suprachoroidal аутотрансплантатом на LRRT (Limoli сетчатки восстановление техника): хирургическая процедура и технические детали

  1. Якорь склеры с 6-0 Шелковый шов, вблизи уступает височно лимба.
  2. Откройте Субконъюнктивальное и subtenonian пространства на 11 мм от лимба уступает височно, используя 5,5" Tenetomy Весткотт изогнутые ножницы.
  3. Вставьте Limoli-Базиле конъюнктивы втягивающего устройства в это пространство, чтобы сделать склеры операционного поля.
  4. Предварительно с помощью 5-мм серповидный нож под углом скоса, вырезать лоскут на стороне в склеры в 8 мм от лимба. Петель лоскут всегда радиальные и слева от хирурга.
  5. В нижней височной квадранте, на 8 мм от лимба откройте глубоко склеры дверь около 5 мм на стороне, радиальные петли с помощью серповидный нож, углом наклона вверх. Осуществляют склерэктомия адекватной глубины для просмотра шифера цвет сосудистое.
  6. Создайте разрыв путем удаления немного крышечки в дистальной части клапана, чтобы способствовать циркуляции крови в последующих suprachoroidal аутотрансплантатом.
  7. Выписка с офтальмологическим щипцами орбитальной жира из разрыв выше нижней косой мышцы. Убедитесь, что Откаченный жир достаточно васкуляризированной чтобы позволить ему выжить после его имплантации.
  8. Осторожно поместите аутологичной жировой лоскут на хориоидеи кровать и шовный материал с хориоидеи 6/0 полиглактин волокна на проксимальной краю двери.
  9. Шовные склеры лоскут, чтобы избежать сжатия на жир ножке или на его питательных судов.
  10. Проникнуть в строме жира ножке с 1 мл геля ОТР (полученные путем центрифугирования крови материала, разделение компонента и тромбоцитов дегрануляции26) с помощью канюли под углом (30 °) 30 G.
  11. Подготовьте стороны конъюнктивы шовный материал. Затем удалите конъюнктивы втягивающего устройства.
  12. Шовные конъюнктивы, используя 6/0 полиглактин волокна.
  13. Перед закрытием, оставьте место для вставки в subscleral пространство, между лоскут, сосудистое и хориоидеи аутотрансплантатом, небольшой гибкой пластиковой трубки с аутологичной жировой трансплантат.
  14. Насыщают остаточное пространство между аутологичной жировой трансплантат, сосудистое и склеры клапанами с 0,5 ЦК СФДВ (Рич ADSCs), ранее подготовленных в шаге 3.2, на небольшой гибкой пластиковой трубки, вставляется в анклаве склеры.
  15. После насыщения в остаточное пространство, закройте шов.
  16. После операции администрировать три дня антибактериальной терапии с 500 мг азитромицина. Кроме того предоставляют терапии глаз капли с антибиотиком и стероидных комбинация клавиш, например хлорамфеникола и бетаметазон, около 15-20 дней.
    Примечание: Аутотрансплантатом из жировых клеток, ADSCs из СФДВ и ОТР теперь было получено26. Уменьшите расстояние между привитые аутологичные клетки и сосудистое, глубокая склерэктомия стимулировать секрецию паракринными аутологичных клеток в хориоидеи поток. Для той же цели разверните область контакта между стебля и сосудистое.

Результаты

С помощью процедуры, представленные здесь, две группы сухой пациентов, пострадавших от AMD, с BCVA равным или больше чем 1 логарифм минимального угла резолюции (logMAR), были зачислены в исследовании. Группа A, включая 11 глаз 11 больных, получил suprachoroidal аутологичные трансплантат...

Обсуждение

Основная цель этого исследования заключалась в оценке ли suprachoroidal трансплантат адипоциты, ADSCs в СФДВ и ОТР может улучшить ва и чувствительности сетчатки в сухих глаз, пострадавших от AMD с течением времени. Другая основная цель было продемонстрировать возможные терапевтические эффекты э...

Раскрытие информации

Представлен на Арво 2015, 3-7 мая-Денвер, CO - США.

Благодарности

Авторы имеют без подтверждений.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Blunt cannula, 3 mm. Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe. BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube. RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm). BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope Nidek Inc, Fremont, CANidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence TomographyCarl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy Retimax for ERG 

Ссылки

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33 (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. , (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. , (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. , (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93 (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4 (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. , 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23 (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94 (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7 (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

132BCVASuprachoroidalLimoli LRRTMicroperimetryGF

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены