La terapia rigenerativa da Suprachoroidal cella autoinnesto nella degenerazione maculare senile secca: Report preliminare In Vivo

Riepilogo

L'obiettivo di questo studio è di valutare se il suprachoroidal dell'innesto di cellule staminali adiposo-derivate incluse nella frazione vascolare stromal e piastrine derivate dal plasma ricco di piastrine mediante la tecnica di restauro Limoli retinico può migliorare l'acuità visiva e risposte di sensibilità retinica in occhi affetti da degenerazione maculare senile secca.

Abstract

Questo studio mira a esaminare se un suprachoroidal dell'innesto di cellule autologhe può migliorare la migliore acuità visiva corretta (BCVA) e risposte a microperimetria (MY) negli occhi affetti da secca di degenerazione maculare senile (AMD) nel corso del tempo attraverso la produzione e la secrezione di fattori di crescita (GFs) il tessuto circostante. I pazienti sono stati assegnati a ciascun gruppo di studio. Tutti i pazienti sono stati diagnosticati con AMD secca e con BCVA uguale o maggiore di 1 logaritmo dell'angolo minimo di risoluzione (logMAR). Un innesto autologous suprachoroidal da Limoli retinica restauro tecnica (LRRT) è stato effettuato su un gruppo, che comprendeva 11 occhio da 11 pazienti. La tecnica è stata effettuata mediante l'impianto di adipociti, cellule staminali adiposo-derivate ottenute dalla frazione vascolare stromal e piastrine da plasma ricco di piastrine nello spazio suprachoroidal. Al contrario, gruppo B, tra cui 14 occhi di 14 pazienti, è stato usato come un gruppo di controllo. Per ogni paziente, la diagnosi è stata verificata da oftalmoscopio confocale del laser e tomografia a coerenza ottica-dominio spettrale (SD-OCT). Nel gruppo A, BCVA migliorato da 0.581 a 0.504 a 90 giorni e a 0,376 logMAR a 180 giorni (+32.20%) postoperatorio. Inoltre, il mio test aumentata di 11,44 dB a 12,59 dB a 180 giorni. I tipi differenti delle cellule innestati dietro la coroide erano in grado di garantire costante secrezione di GF nel flusso coroideale. Di conseguenza, i risultati indicano che l'acuità visiva (VA) nel gruppo innestato può aumentare più di nel gruppo di controllo dopo sei mesi.

Introduzione

Terapia cellulare, che consiste dell'iniezione sistemica o locale di cellule staminali/progenitrici nella zona danneggiata per trattare i disordini cronici multipli, ha attirato molta attenzione nell'ultimo decennio¹. Dal 1990, fattori di crescita (GFs) sono stati studiati per il loro ruolo potenzialmente terapeutico nell'atrofia retinica². Infatti, molte cellule umane possono produrre GFs, che sono proteine specifiche che sono in grado di bloccare o rallentare l'apoptosi, cioè, la morte programmata delle cellule³.

È noto che asciutta degenerazione maculare senile (AMD) è una malattia della retina atrofica dove morte graduale e irreversibile delle cellule comporta lesioni per lo strato dei fotorecettori e, di conseguenza, la perdita della funzione visiva centrale⁴. AMD è la causa principale di cecità nella gente oltre 55 anni di età nei paesi sviluppati e rappresenta l'80% di tutte le degenerazioni maculare, che mancano di un efficace trattamento per data.

Parecchi studi hanno indicato che ci sono varie fonti da cui possono essere ottenute GFs autologhi. Questi comprendono diversi tipi di cellule, compreso le cellule stromale adipose derivate dal grasso orbitale, piastrine derivate dal plasma ricco di piastrine (PRP) e adiposo-ha derivato le cellule staminali (CSTA) incluse nella frazione vascolare stromal (SVF) del tessuto adiposo^{5 ,6,7}. L'attuale set di GF assicura neuroenhancement retinica e ricerche condotte da Filatov, Meduri, Pelaez e Limoli ha dimostrato che il trapianto di grasso autologo (AFT) è efficace^8,9,10.

Inoltre, uno studio preliminare ha mostrato miglioramenti significativi nei dati dell'elettroretinogramma (ERG), registrato post suprachoroidal innesto autologous, secchezza degli occhi colpiti da AMD¹¹. Il tessuto innestato chirurgicamente nello spazio suprachoroidal modulata la secrezione paracrina delle cellule retiniche, ritardando la loro apoptosi^6,7,12. Considerando lo spessore di strato nucleare esterno, l'esame istologico della retina delle cavie ha mostrato che GFs potrebbe avere un effetto trofico sulla retina. Pertanto, l'uso diretto o indiretto di GFs può potenzialmente portare benefici terapeutici attraverso un equilibrato rapporto tra molecolari induttori e inibitori^6,7,12.

Lo scopo di questo metodo è per valutare se l'innesto di suprachoroidal degli adipociti, CSTA in SVF e PRP può migliorare meglio corretto l'acuità visiva (BCVA) e microperimetria (MY) risposte a secchezza degli occhi colpiti da AMD. Questo studio mira a dimostrare l'effetto terapeutico di autoinnesto sulla base della produzione GF, secondo la letteratura citata^6,7,12,13.

Protocollo

Il protocollo di studio è stato approvato dal comitato etico della Low Vision Academy e tutti i soggetti hanno firmato un consenso scritto secondo la dichiarazione di Helsinki. Questo studio di ricerca ha ricevuto l'approvazione etica sia Loughborough e Università di Sheffield.

Nota: I criteri di inclusione ed esclusione dei pazienti di degenerazione maculare senile secca per ricevere suprachoroidal innesto autologous da Limoli retinica restauro tecnica (LRRT) è descritto nella tabella 1.

1. diagnosi dei pazienti di degenerazione maculare senile secca

1. Accertare la diagnosi con l'oftalmoscopio del laser confocale, SD-OCT e MY.
2. Valutare BCVA di ogni gruppo per lontano e vicino a distanza. Misura VA per visione da vicino (primo piano) in punti (PT). Misurare BCVA al tempo 0 (T0), 90 (T90), e 180 giorni (T180) rispetto allo studio di retinopatia diabetica iniziale trattamento grafici (EDTRS) a 4 metri in logMAR.
3. Record Mesopica scotopica, elettrico e l'attività delle cellule fotopico o flash ERG, secondo le norme fissate nel 2009 dalla International Society for Clinical Electrophysiology di visione (ISCEV)¹¹.

2. amputate

Nota: Il gold standard in anestesia durante LRRT è l'anestesia d'attualità, rinforzato da infiltrazione di sub-tenone di anestesia e sedazione. In casi specifici, l'anestesia generale è preferito.

1. Ottenere corneale e congiuntiva anestesia applicando topici anestetici locali instillato goccia a goccia 15-20 min prima della chirurgia con lidocaina al 4% e ropivacaina all'1%.
2. Iniettare l'anestesia di infiltrazione direttamente nel sub-congiuntivale e spazi di subtenon.
3. Utilizzare infiltrazione locale sia nella regione addominale, prima dell'estrazione del tessuto adiposo e nel sub-congiuntivale e spazi di sub-tenone, 12 mm dal limbus. Adottare anestetico locale di carbocaine o marcain mescolato con 1.200 IU epinefrina.
4. Fornire sedazione intraoperatoria attraverso l'anestetico, che può essere eseguita correttamente utilizzando fentanil come un analgesico narcotico attraverso ripetuti piccoli boli. Il dosaggio è generalmente 0,025 mg di fentanil con 1 mg di midazolam a bolo.

3. Limoli retinica restauro tecnica preparazione

Nota: Questa tecnica rappresenta una variante dell'intervento di Pelaez, mediante il quale grasso autologo orbitale viene trapiantato in subscleral spazio^1,6,7,12. Chirurgicamente innestate le cellule possono produrre molti GFs con proprietà neurotrophic e angiotrophic nel tessuto circostante, coroide e retina^{18,19,20,21,22 ,23,24,25}. In LRRT, la distanza tra innestate cellule autologhe e coroide è ridotto per mezzo di profondità sclerectomy, e l'area di contatto tra il gambo e la coroide viene espanso per promuovere la secrezione di cellule autologhe di paracrine nel flusso coroideale^{9, 10,14}.

1. Eseguire la disinfezione corretta di ogni occhio prima della chirurgia con l'innesto cellulare tra la coroide e sclera, una procedura chiamata Limoli retinica restauro tecnica (LRRT)^15,16,17.
2. Dell'innesto CSTA, ottenuti da Coleman et al e tecnica di Lawrence (Figura 1) dal grasso addominale, in SVF a sovrachoroidal spazio^15,16,17.
3. Il pedicle adiposo si infiltra in con le piastrine derivato da PRP gel ottenuto attraverso le seguenti fasi.
4. Centrifugare il sangue^6,12 e raccogliere il plasma ricco di piastrine (PRP). Lo stimolo alla degranulazione piastrinica provoca il rilascio GF nel peduncolo adiposo^6,12.

4. strategia e specifiche tecniche

Nota: Il tessuto grasso è raccolti e purificato dallo strato sottocutaneo addominale dei pazienti, secondo il Lawrence e Coleman tecnica¹⁷(Tabella materiali).

1. Manualmente raccolto 10 mL di tessuto grasso dallo strato sottocutaneo addominale di ogni paziente, utilizzando una cannula smussa 3 mm collegato ad una siringa di bloccaggio, secondo il Lawrence e Coleman tecnica¹⁷ (figure 2A/2B).
2. Separare SVF puro del tessuto grasso da sangue, grasso, olio e liquido mediante centrifugazione per 5 min a 1.500 x g a 20 ° C (Figura 2C). La SVF è molto ricco di CSTA¹⁷.
3. Raccogliere 8 mL di sangue periferico umano con un ago 22G e in un tubo separato per la preparazione del PRP.
4. Centrifugare il sangue prelevato per 5 min a 1.500 x g a 20 ° C (Figura 2D). In LRRT, il conseguente risultato di cambiamenti nella migliore sopravvivenza dell'innesto grasso autologo, proliferazione ADSC, che favorisce l'aspersione coroidica aumentata, ed una modulazione più completa dell'azione di quei fattori che sono secrete solo da grasso^{7, 11,17}.
5. Costruire la tasca di suprachoroidal (maggiori dettagli nel passaggio 4, in particolare 4.4 e 4.5) per ospitare l'innesto ottenuto da grasso orbitale e saturare il volume residuo di questa tasca con una miscela di CSTA da SVF e PRP, ottenuta secondo la Lawrence e Coleman tecnica¹⁷.

5. Suprachoroidal dell'autoinnesto di LRRT (tecnica di restauro Limoli retinica): procedura chirurgica e dettagli tecnici

1. Ancorare la sclera con sutura seta 6-0, vicino al limbus temporale inferiore.
2. Aprire lo spazio subconjunctival e subtenonian alle 11 mm dal limbus temporale inferiore, utilizzando forbici curve Westcott Tenetomy 5.5".
3. Inserire il riavvolgitore congiuntiva Limoli-Basile in questo spazio per rendere un campo chirurgico scleral.
4. Usando una smussatura inclinata 5 mm coltello mezzaluna up, pre-tagliare un lembo sul lato nella sclera a 8mm, dal limbus. La cerniera patta è sempre radiale e a sinistra del chirurgo.
5. Nel quadrante inferiore-temporale, ad 8 mm dal limbus, aprire una porta profondo scleral di circa 5 mm dal lato di cerniera radiale utilizzando un coltello mezzaluna, smusso angolato fino. Eseguire sclerectomy ad una profondità adeguata per visualizzare il colore ardesia della coroide.
6. Creare un gap rimuovendo un piccolo opercolo nella parte distale della falda, al fine di facilitare la circolazione del sangue nell'autoinnesto suprachoroidal successive.
7. Estratto con il forcipe oftalmologico al grasso orbitale da un gap di sopra del muscolo obliquo inferiore. Assicurarsi che il grasso estratto è sufficientemente vascularized per permettergli di sopravvivere dopo l'impianto.
8. Posizionare delicatamente la falda di grasso autologa sul letto coroidico e sutura con fibra di polyglactin coroidica 6/0 al bordo prossimale della porta.
9. Sutura la falda scleral per evitare la compressione il pedicle grasso o sui suoi vasi nutrienti.
10. Infiltrano lo stroma del pedicle grasso con 1 mL di gel PRP (ottenuto per centrifugazione del materiale di anima, la separazione del componente e di degranulazione piastrinica²⁶) mediante una cannula angolata (30 °) 30 G.
11. Preparare i lati del conjunctiva per la sutura. Quindi, rimuovere il retrattore congiuntiva.
12. Suturare la congiuntiva, utilizzando fibra di polyglactin 6/0.
13. Prima della chiusura, lasciare uno spazio per inserire nello spazio subscleral, tra la falda, la coroide e l'autoinnesto coroidico, un piccolo tubo di plastica flessibile con l'innesto di grasso autologo.
14. Saturare lo spazio residuo tra l'innesto di grasso autologo, coroide e scleral flap con 0,5 cc di SVF (ricchi di CSTA), precedentemente preparata al punto 3.2, da un piccolo tubo di plastica flessibile, inserita nella tasca scleral.
15. Dopo che satura lo spazio residuo, chiudere la sutura.
16. Dopo la chirurgia, amministrare tre giorni di terapia antibiotica con azitromicina 500mg. Inoltre, è possibile fornire terapia di collirio con una combinazione antibiotica e steroideo, quali cloramfenicolo e betametasone, per circa 15-20 giorni.
    Nota: Un autoinnesto costituito da cellule di grasso, CSTA da SVF e PRP ora è stato ottenuto²⁶. Ridurre la distanza tra le cellule autologhe innestate e coroide profondità sclerectomy per stimolare la secrezione di paracrine di cellule autologhe nel flusso coroideale. Per lo stesso scopo, espandere l'area di contatto tra il gambo e la coroide.

Risultati

Due gruppi di pazienti affetti da AMD secchi, con BCVA uguale o maggiore di 1 logaritmo dell'angolo minimo di risoluzione (logMAR), utilizzando la procedura qui presentata, sono stati arruolati nello studio. Gruppo A, compreso 11 occhio di 11 paziente, innesto autologous suprachoroidal ricevuti da Limoli retinica restauro tecnica (LRRT), mentre del gruppo B, tra cui 14 occhi di 14 pazienti, è stato usato come un gruppo di controllo.

Discussione

Lo scopo primario di questo studio era di valutare se l'innesto di suprachoroidal degli adipociti, CSTA in SVF e PRP potrebbe migliorare VA e sensibilità retinica in secchezza degli occhi colpiti da AMD nel corso del tempo. Un altro obiettivo principale era di dimostrare gli effetti terapeutici possibili di queste cellule, sulla base della recente letteratura, poiché parecchi studi preclinici hanno suggerito che la terapia basata su GF potrebbe essere utile per la cura del paziente in parecchie malattie.

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blunt cannula, 3 mm.	Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.	RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge	RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).	BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0	IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope	Nidek Inc, Fremont, CA	Nidek F10
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography	Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany	SD-OCT
Maia 100809 Microperimetry	CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system,	C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy		Retimax for ERG