DNA Origami Fork Assembly for DNA Origami Nanoantenna (DONA)

Для самостоятельной сборки структуры ДНК-оригами в одном горшке начните с приготовления смеси из 2,5 наномоляра круглой каркасной цепи M13mp18 и 100 наномоляров из 201 короткого олигонуклеотидного скоба в буфере TAE, дополненного 15 миллимолярным хлоридом магния. Затем отрегулируйте общий объем раствора до 100 микролитров, используя сверхчистую воду. Отжигают раствор в термоциклере, используя температурный градиент.

Начните с быстрого нагрева до 80 градусов по Цельсию и шаг за шагом следуйте отображаемой программе градиента температуры. Чтобы очистить смесь от излишков скоб, добавьте 100 микролитров раствора ДНК-оригами в фильтр амикона с молекулярной массой 100 килодальтон. Затем следует добавление 400 микролитров сверхчистой воды.

Затем центрифугу при 6 000 г в течение восьми минут при комнатной температуре. После центрифугирования снимите фильтр и переверните трубку, чтобы выбросить фильтрат. Добавьте 400 микролитров сверхчистой воды в фильтр и центрифугу, как показано ранее.

Собрать очищенный раствор наноструктуры. Переверните фильтр вверх дном в новой пробирке и центрифуге при 1 000 г в течение двух минут при комнатной температуре, следуя инструкциям производителя. Правильная сборка вилки ДНК-оригами была обеспечена с помощью атомно-силовой микроскопии или АСМ-визуализации.

Как и ожидалось, большинство вилок были прочными, без сломанных рук. Однако мост между плечами было трудно изобразить из-за его малого диаметра и высокой гибкости.