Введите L.reuteri в 10 миллилитров бульона MRS, содержащего соответствующий антибиотик, и инкубируйте в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия. На следующий день центрифугируйте культуру в предварительно охлажденной центрифуге Выбросьте надосадочную жидкость и промойте гранулу в двух миллилитрах стандартного буфера P1 Снова центрифуга и выбросьте надосадочную жидкость перед тем, как снова суспендировать гранулу в 250 микролитрах модифицированного буфера P1. Инкубируйте в течение одного-двух часов при температуре 37 градусов Цельсия.
Далее добавьте 250 микролитров буфера Р2 и перемешайте, перевернув четыре-шесть раз. Через пять минут добавьте 350 микролитров буфера N3 и перемешайте, перевернув трубку. Центрифугируйте при 10 000 G в течение 10 минут и перенесите как можно больше надосадочной жидкости в спиновую колонку.
Снова центрифугируйте в течение 60 секунд и выбросьте проточный поток. Промойте отжимную колонну 500 микролитрами буферного PB и центрифугу, отбросив проточный. Промойте спиновую колонку 750 микролитрами буферного полиэтилена и центрифугируйте при 10 000 G в течение 60 секунд.
Выбросьте проточную жидкость и снова центрифугируйте в течение 60 секунд, чтобы удалить остатки буфера. Поместите спиновую колонку в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров. Добавьте от 20 до 30 микролитров дважды дистиллированной воды без Dnase и РНКазы в фильтр спиновой колонны и оставьте на одну-две минуты перед центрифугированием при 10 000 G в течение 60 секунд.
Проведите стандартную ПЦР-реакцию с использованием специфичных для плазмид праймеров с элюатом, обеспечивающим матрицу ДНК, включая положительный контроль с плазмидой, полученной из мини-препарата E.coli. Если пропустить мини-преп элюю через агарозный гель, это приведет к размазыванию, а не к заметным полосам. Однако последующая ПЦР с использованием элюата в качестве матрицы ДНК позволяет получить ожидаемые размеры полосы.
