Настройка аппарата для микрофлюидного сдвига для анализа одноклеточной жидкости

Начните протокол с подготовки вязкой проточной среды для анализа на сдвиг. Для этого предварительно нагрейте основную питательную среду в течение примерно 10-20 минут при температуре от 60 до 70 градусов Цельсия с помощью магнитной мешалки или горячей пластины. Непрерывно помешивая среду, аккуратно добавьте в нее метилцеллюлозу, чтобы частицы метилцеллюлозы быстро диспергировались без коагуляции.

Оставьте этот процесс на 15–24 часа, чтобы получить прозрачную однородную смесь среды и целлюлозы. Чтобы настроить срезное устройство, прикрепите резиновую прокладку к проточному тракту, чтобы закрепить соединение между проточной камерой и чашкой Петри, и обеспечьте контролируемый равномерный поток отдельных ячеек. Резиновая прокладка бывает разных размеров в зависимости от желаемого профиля потока и области наблюдения.

Затем настройте систему пробирного анализа, состоящую из двойных шприцев объемом 60 или 100 миллилитров, соединенных с программируемым шприцевым насосом для инфузии и забора вязких питательных сред. Наполните шприц подготовленной вязкой проточной средой и прикрепите заполненный шприц к соответствующему месту на шприцевом насосе. Затем прикрепите пустой шприц к другому месту расположения шприца на шприцевом насосе.

Используя трубки и соединители трубок 1/16 дюйма, подсоедините оба шприца к проточной камере. Запрограммируйте насос на закачку и забор определенного объема жидкости с заданной скоростью и выберите соответствующие шприцы. Пример программы показан на экране.

Аспирируйте питательную среду для клеточных культур из чашки Петри, чтобы подготовить ее к сдвигу. Далее вставьте и закрепите проточную камеру с резиновой прокладкой на чашке Петри, содержащей прикрепленные ячейки. Поместите встроенную микрофлюидную проточную камеру с клетками в чашке на перевернутый микроскоп, подключенный к монитору.

Теперь установка готова к подаче напряжения сдвига жидкости на одну ячейку и оптическому мониторингу результирующей деформации ячеек.