Проведение анализа и визуализации сдвига одиночных клеток

Для выполнения протокола анализа сдвига одиночных клеток используйте предварительно собранную аппаратуру для сдвига, состоящую из встроенной микрофлюидной проточной камеры, размещенной на чашке Петри, содержащей интересующие клетки. Поместите всю установку на инвертированный микроскоп с достаточно высоким объективом и монитором. Сфокусируйте объектив микроскопа, обеспечив достаточный контраст и четкие края клеток.

Перемещайте предметный столик микроскопа, чтобы клетки были четко видны на мониторе дисплея и отображались в режиме реального времени. Выберите одну или несколько отдельных ячеек в пределах визуализации или траектории потока подогнанной проточной камеры и чашки Петри. Чтобы поддерживать непрерывный равномерный поток вязкой среды, выберите одинаковые скорости инфузии и забора.

Обеспечьте надлежащий ламинарный поток жидкости с числом Рейнольдса или RE менее 100. Нажмите кнопку «Запустить» на срезном насосе, чтобы впрыскивать и откачивать сдвигающую жидкость с непрерывной скоростью. Убедитесь, что во время инфузии жидкости не образуются пузырьки.

Начните запись видео, нажав кнопку «Запись» в программном обеспечении до того, как введенная сдвиговая жидкость вступит в контакт с интересующей клеткой под микроскопом. Продолжайте записывать в течение семи минут или в течение желаемой продолжительности воздействия на стресс или до тех пор, пока интересующая вас ячейка не оторвется от дна чашки. Нажмите «Остановить запись» в программном обеспечении микроскопа, когда прогон будет завершен по желанию.

Программное обеспечение автоматически сохраняет изображения и видео, которые могут быть собраны с помощью флешек, для дальнейшего анализа. Извлекайте изображения в виде файлов TIFF, желательно со скоростью один кадр в секунду для легкого анализа.