Выделение синовиальных фибробластов

Используйте клеточные суспензии, полученные после переваривания коленных суставов мыши, и высадите суспензию на посуду, покрытую коллагеном. Выдержите блюдо в течение часа при температуре 37 градусов Цельсия во влажной атмосфере с 5% углекислым газом. После инкубации соберите неадгезивные клетки с помощью пипетки.

Вымойте покрытую коллагеном посуду питательной средой и соберите среду. Затем добавьте в чашку свежую среду для культивирования адгезивных клеток, которые демонстрируют морфологию фибробластоидов. Обработайте клетки 0,05% трипсином в сбалансированном солевом растворе Хэнка и пропустите субсливающиеся клетки.

Если требуются высокочистые фибробластоподобные клетки, проведите повторное пассирование. Убедитесь, что вы используете ячейки с менее чем пятью проходами. Фибробластоподобные клетки были выделены из тканей воспалительного артрита, индуцированных у самок мышей C57BL/6 в возрасте от 7 до 8 недель.

Чистоту выделенных клеток оценивали с помощью RTQPCR мРНК маркеров синовиальных фибробластов, таких как Vcam1, Cdh11, Col6a1 и Csf1 в выделенных клетках, что позволяет предположить, что богатые фибробластами фракции были выделены из ткани синовита.