Для извлечения EPF из грибковой библиотеки начните с размазывания грибковых изолятов на планшете SDA с четвертью прочности. Инкубируйте его в темноте при температуре 25 градусов Цельсия в течение 10-14 дней до сбора урожая конидий. После этого пипетируйте 2-3 мл 0,03%Tween 80 на культивируемый планшет.
Затем используйте петлю для прививки, чтобы соскоблить конидии. Далее перенесите грибковую суспензию в центрифужную пробирку. Энергично перебейте суспензию на максимальной скорости, затем выведите образец пипеткой в гемоцитометр для подсчета количества конидий.
Разведите конидии в суспензии с использованием 0,03%Tween 80 до получения желаемой концентрации. Чтобы подготовить камеру прививки, сначала вырежьте листовой диск диаметром 9 сантиметров, используя в качестве формы дно чашки Петри или ножницами. Далее приготовьте 1,5%-ный водяной агар для каждого блюда, используя микроволновую печь.
Налейте 30 мл охлажденного водяного агара в чашку Петри и дайте ему застыть в ламинарном колпаке. Когда поверхность агара станет полутвердой, поместите листовой диск абаксиальной поверхностью вверх, затем слегка прижмите его, чтобы он был погружен в агар. Теперь поместите 20 бескрылых взрослых особей на листовой диск.
Откройте крышку камеры для посева, чтобы распылить 0,3 мл суспензии конидий непосредственно на тлю и листовой диск. Как только суспензия высохнет, закройте крышку, чтобы предотвратить утопление горчичной тли. Впоследствии запечатайте камеру для посева с помощью парафиновой пленки для поддержания высокого уровня влажности.
Поместите камеру в инкубатор, установленный при температуре 25 градусов Цельсия со светлым и темным фотопериодом по 12 часов каждый. Используйте стереомикроскоп для подсчета смертности каждые 12 часов в течение 5 дней. Скрининг вирулентности показал стабильную выживаемость горчичной тли, при этом контрольная группа продемонстрировала 85% выживаемость.
Cordyceps cateninnulata продемонстрировал самую быструю способность убивать тлю, что привело к 50% и 90% моральному состоянию через 3 дня и 4,5 дня после инокуляции, или DPI. Штаммы Beauveria 141, 143 и 153 показали медленные способности к уничтожению тли со смертностью всего 5% при 3 DPI. За исключением Purpureocillium, большинство изолятов EPF показали скорректированные показатели смертности выше 70% в пределах 5 DPI.
Beauveria bassiana продемонстрировала самый высокий уровень смертности 100% среди изолятов EPF. Микоз EPF наблюдался на трупах горчичной тли, инфицированных видами Metarhizium, Beauveria, Purpureocillium lilacinum и Cordyceps cateniannulata во время скрининга вирулентности.
