Приготовление бактериального посевного материала для образования биопленки Acinetobacter

Чтобы начать процесс приготовления бактериального инокулята, соберите от 2 до 10 микролитров бактериального штамма из флакона с помощью стерильного наконечника для пипетки и завите им коммерчески доступную кровяную агаровую пластину. С помощью стерильной петли прорежьте поверхность агара, истончая ее периодическим пламенем. Инкубируйте подготовленную агаровую пластину в перевернутом положении при температуре 30 градусов Цельсия в течение примерно 20-24 часов.

Далее стерильной иглой отбирают одну колонию бактериальной культуры и инокулируют этой культурой пять миллилитров стерильного бульона BHI. Инкубируйте инокулированный бульон в встряхивающем инкубаторе при температуре 30 градусов Цельсия со скоростью 150 оборотов в минуту в течение примерно 20-24 часов. Затем переложите один миллилитр культуры в стерильную микроцентрифужную пробирку и центрифугируйте при температуре 6 000 г и комнатной температуре в течение 10 минут.

После центрифугирования выбросьте надосадочную жидкость. Добавьте один миллилитр стерильного фосфатно-солевого буфера (PBS) в гранулу и повторно суспендируйте ее с помощью вихря. Повторно суспендированную гранулу центрифугировать при 6 000 г в течение 10 минут при комнатной температуре и выбросить надосадочную жидкость.

На этот раз полученную гранулу повторно суспендируйте в стерильном, разбавленном в десять раз бульоном BHI с помощью вортекса. Убедитесь, что оптическая плотность составляет около 0,1 на расстоянии 600 нанометров.