Оценка жизнеспособности биопленки Acinetobacter

Начните с добавления одного миллилитра бактериального инокулюма в каждую лунку стерильной 12-луночной пластины из полистирола. Инкубируйте тарелку при температуре 25 градусов Цельсия в течение 24 часов. Затем удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки.

Осторожно добавьте в каждую лунку по 1,5 миллилитра стерильного фосфатного буферного раствора или PBS, и снова удалите надосадочную жидкость с помощью пипетки. После повторного добавления одного миллилитра стерильного PBS в каждую лунку используйте подходящие скребки для соскабливания поверхностей дна и стенок лунок. Переложите собранную клеточную суспензию в стерильную пластиковую пробирку с маркировкой 10 на отрицательную, содержащую девять миллилитров физиологического раствора и от 10 до 20 стеклянных шариков.

Закрутите трубку в течение 60 секунд на максимальной скорости. Далее проводят десятикратное серийное разведение, перенося один миллилитр клеточной суспензии из предыдущей пробирки в другую стерильную пробирку, помеченную цифрой 10, в отрицательную двойку, содержащую девять миллилитров физиологического раствора. Продолжайте этот процесс последовательного разведения до пробирки 10 до отрицательной семерки.

Распределите по 100 микролитров из каждого разведения на отдельные пластины агара acinetobacter. Инкубируйте агаровые пластины при температуре 30 градусов Цельсия в течение 24-42 часов. Затем вручную подсчитайте количество типичных красных колоний на каждой пластине, рассматривая те, которые находятся в диапазоне от 10 до 250.

Все изоляты acinetobacter, за исключением A. bouvetii, имели клетки, эквивалентные семи-восьми log КОЕ на лунку в их биопленках. В то время как A. bouvetii имел гораздо меньшее количество клеток — 4,4 Log КОЕ.