Чтобы начать 3D-печать фотонастраиваемых гидрогелевых конструкций, поместите стеклянный шприц с гидрогелевыми биочернилами, содержащими фибробласты, внутрь печатающей головки и прикрепите компоненты печатающей головки, обеспечив прочную сборку для печати. Затем с помощью стрелок направления в программном обеспечении Pronterface вручную и осторожно отрегулируйте положение экструзионной иглы в суспензии опорной ванны в центре лунного колодца. Оставьте не менее одного миллиметра навозной жижи ниже кончика иглы.
После того, как кончик иглы будет правильно размещен, нажмите кнопку печати в программном обеспечении Pronterface и дождитесь завершения печати. Повторяйте ранее продемонстрированные шаги до тех пор, пока не будет получено желаемое количество биопечатных конструкций. После печати оставьте пластину для лунки с накрытыми конструкциями при комнатной температуре в шкафу биобезопасности на один час.
Это позволяет проводить катализируемую основаниями полимеризацию с помощью фотоконфигурируемых гидрогелевых биочернил. Затем поместите луночную пластину с 3D-биопечатными конструкциями в стерильный инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия на 12-18 часов, чтобы растопить вспышку для поддерживающей ванны. Затем внутри шкафа биобезопасности измените носители вокруг биопечатных конструкций.
Для этого вручную удалите фильтрующий материал и расплавленную желатиновую ванну из лунок, не нарушая конструкции. Затем добавьте в каждую лунку соответствующий объем среды с низким содержанием сыворотки. Опять же, за 24 часа до желаемого момента застывания заменяйте среды в лунках на среды с низким содержанием сыворотки, дополненные 2,2 миллимолярными стерильными LAP.
В желаемый момент времени затвердевания удалите половину фильтрующего материала из лунок, которые необходимо затвердеть, и поместите пластину без крышки под ультрафиолетовый или ультрафиолетовый свет OmniCure. Включите ультрафиолетовый свет с помощью полосового фильтра с яркостью 365 нанометров, чтобы сделать конструкции более жесткими на пять минут. После затвердевания удалите остатки среды из этих лунок, прежде чем добавлять в каждую лунку свежие среды с низким содержанием сыворотки.
Верните планшет в инкубатор до тех пор, пока не будет выполнено исследование активации фибробластов в желаемый момент времени, Комбинация кислотных биочернил и базовой поддерживающей суспензии для ванны способствовала полимеризации 3D-биопечатных конструкций и сохранила цилиндрические структуры. Микроскопия гидрогеля с флуоресцентной меткой показала поры внутри гидрогеля, индуцированные микрочастицами желатина в поддерживающей ванне. Конфокальная микроскопия показала чрезмерную жесткость пространственного контроля в 3D.
Анализ жизнеспособности фибробластов показал, что конструкции с толщиной стенки 300 микрон и 4 миллионами клеток на миллилитр превосходят все другие условия в каждый момент времени. Жизнеспособность достигла пика на седьмой день, когда около 91% клеток были окрашены живыми, а к 14-му дню 85% все еще были жизнеспособны.
