Установите перфузионный набор в устройство в соответствии с протоколом производителя. Внутри колпака прикрепите к нему пустой жидкостный чип и добавьте среду SFM-34 с добавлением цитокина, чтобы заполнить оба резервуара в стерильных условиях. Перенесите жидкостный блок в инкубатор, подключив его к насосу для удаления пузырьков и калибровки.
Осторожно извлеките жидкостный блок с подключенным комплектом из инкубатора и перенесите его в колпак вместе с чипсами, содержащими клетки. Зажмите трубку с обеих сторон тестовой микросхемы. Снимите зажимную трубку с тестовой микросхемы и подсоедините микросхему, содержащую клетки, к трубке.
Сняв или открыв зажимы, перенесите систему в инкубатор и подключите воздушный насос к жидкостному блоку. Снимите блок жидкости с насоса и переместите его в капот. Зажмите трубку с обеих сторон стружки и снимите трубку из резервуаров на стружке.
Аккуратно удалив среду из чипа, промойте клетки фосфатно-солевым буфером Dulbecco или DPBS. Добавьте 150 микролитров диссоциативного буфера и инкубируйте в течение трех минут при температуре 37 градусов Цельсия. Когда ячейки отсоединены, соберите буфер диссоциации из одного резервуара и промойте канал один раз с помощью DPBS.
Промойте резервуар с помощью промывочного буфера, чтобы собрать оставшиеся элементы из чипа. Наконец, добавьте один миллилитр промывочного буфера к собранным клеткам, прежде чем использовать 10 микролитров из него для подсчета клеток. До стимуляции клетки демонстрировали случайную ориентацию, но при стимуляции они переориентировались параллельно направлению потока.
Профиль экспрессии CD34 клеток, культивируемых под потоком в течение пяти дней, и процент CD34-положительных клеток, полученных из жидкостного канала, показали эффективность протокола.
