Для начала инкубируйте оплодотворенные куриные яйца во влажном инкубаторе при температуре 38 градусов Цельсия. Затем поместите куриный эмбрион стадии от 28 до 32 в 60-миллиметровую чашку Петри, наполненную HBSS. После вскрытия кожи и головы дорсального эмбриона осторожно потяните за зачатки конечностей, чтобы переместить вентральную сторону тела вниз.
Теперь вдоль двух сторон тела эмбриона сделайте разрез спереди и сзади. Обхватите зачатки конечностей в продольном направлении с помощью пары щипцов, чтобы стабилизировать тело. С помощью часовых щипцов аккуратно отшелушите кожу от шеи до области хвоста.
С помощью острых ножниц аккуратно удалите оставшиеся подкожные ткани, все еще прикрепленные к отслоившейся коже, и разгладьте края кожи. Далее добавьте по два миллилитра дополненного DMEM в каждую лунку шестилуночной посуды. После добавления антибиотиков в лунки поместите внутрь лунки стерильный вкладыш для культуры тканей, обеспечив окружение среды снаружи вкладыша для культуры.
Затем переместите кожу на шпатель, одновременно погруженный в HBSS, чтобы предотвратить складки и складки. После этого переложите вырезанную кожуру в чашку, содержащую HBSS. Медленно сдвиньте кожицу со шпателя на вкладыш для культуры, не складывая.
С помощью пипетки объемом 200 микролитров удалите излишки HBSS из вкладыша. Наконец, инкубируйте культуры эксплантации кожицы при температуре 37 градусов Цельсия со смесью 5% углекислого газа и 95% воздуха. Заменяйте среду каждые два дня.
Перьевые зачатки развились в короткие перьевые почки после двух дней в культуре. А длинные перьевые почки развились после четырех дней в культуре. Дермальные плакоды были более зрелыми по средней линии, чем по бокам.
