Для начала инкубируйте оплодотворенные куриные яйца во увлажненном инкубаторе. Далее приготовьте два раза CMF солевой раствор с 0,25% буфером ЭДТА. Затем снимите кожу с куриных эмбрионов в растворе HBSS и инкубируйте их в двукратном растворе CMF-EDTA на льду в течение 15-20 минут.
С помощью щипцов часовщика аккуратно отделите эпителий и мезенхиму. Затем перенесите выделенный эпителий и мезенхиму в одну чистую посуду, содержащую HBSS. Для рекомбинации поместите мезенхиму на чашку Петри, содержащую HBSS, затем поместите на нее эпителий, выровняв его вдоль передней/задней оси мезенхимы.
В качестве альтернативы можно повернуть эпителий на 90 градусов от мезенхимальной передней задней оси. Далее переложите рекомбинированные шкурки во вкладыши для культуры в шесть лунок посуды для культуры. Удалите излишки HBSS вокруг рекомбинированной кожи.
После добавления DMEM, содержащего 10% FBS, во внешнюю лунку вкладыша нанесите тонкий слой DMEM в камеру вставки, чтобы эксплант оставался полуувлажненным. Наконец, поместите кожные рекомбинанты в инкубатор при температуре 37 градусов в среду с 5% углекислого газа и 95% воздуха. Отслеживайте фенотипические изменения на начальных этапах развития кожи с помощью покадровой съемки с помощью установленного препарирующего микроскопа.
Новые плакоды появились вскоре после рекомбинации и превратились в короткие перьевые бутоны через два дня после рекомбинации. Длинные перьевые бутоны развились за четыре дня. При повороте эпителия на 90 градусов ориентация новых почек определялась эпителием.
