Изотермическая титрованная калориметрия для оценки образования тройного комплекса, индуцированного PROTACS

Для начала приготовьте растворы для клетки, шприца и для очистки. Добавьте протеин или буферные образцы в три последовательные лунки на 96-луночном планшете. Теперь добавьте 100% ДМСО соответственно, чтобы конечная концентрация составила 2%Запустите все четыре титрования на микрокалориметре.

Каждое титрование должно состоять из первоначальной инъекции 0,4 микролитра белка со скоростью два микролитра в секунду, за которой следует 19 инъекций 2 микролитров шприцевого раствора со скоростью 2 микролитра в секунду с интервалом 120 секунд, всего 20 инъекций. Проводите все эксперименты при температуре 25 градусов Цельсия при перемешивании при 600 оборотах в минуту. Для анализа данных подгоните данные к одной модели сайта связывания, чтобы получить стехиометрию n, константу диссоциации и энтальпию связывания.

Проведена характеризация бинарного комплекса VHL MZ1 и комплекса VHL MZ1 Brd4. Наблюдалась положительная кооперативность.