Для начала подготовьте прозрачные образцы почечной ткани. Затем включите конфокальный микроскоп, сначала активировав мощность лазера, а затем включив переключатель управления конфокальным микроскопом. Затем включите компьютер, включите микроскоп и запустите конфокальное оборудование.
После запуска самодиагностики запустите конфокальное программное обеспечение. Выберите подходящий объектив. Извлеките образец из реагента кубического R и поместите его в конфокальную чашку.
Накройте его, чтобы предотвратить высыхание реагента кубического R. Переместите образец в центр поля зрения и отрегулируйте фокусировку до тех пор, пока образец не окажется в фокусе. Для 3D-реконструкции отрегулируйте плоскость масштабирования в одном направлении до тех пор, пока не будет видно флуоресценции, определив это положение как верхнее.
Затем отрегулируйте плоскость масштабирования в противоположном направлении до тех пор, пока не будет видно флуоресценции, определив это положение как нижнее. Нажмите кнопку «Выполнить» в правом нижнем углу диалогового окна, чтобы начать сканирование. Для реконструкции большого изображения расположите поле зрения в центре образца и установите его в качестве центра.
Выберите поле зрения два на два. В многофункциональном интерфейсе ND выберите стек Z для восстановления больших изображений. При необходимости отрегулируйте различные параметры на панели и нажмите кнопку «Выполнить», чтобы начать сканирование.
Приклейте прозрачную почку к адаптеру для фиксации образца с помощью клея и подождите, пока почка надежно закрепится. Затем погрузите почку в контейнер для образцов и вставьте контейнер для образцов в систему микроскопа. Загерметизируйте люк.
В интерфейсе locate отрегулируйте образец в соответствующее положение для наблюдения. Переключитесь на интерфейс захвата, установите оптический путь. Выберите лазер с длиной волны 488 нанометров.
Выберите фильтр светового луча 405-488-561-640, затем установите блок оптического разделительного фильтра на SBS LP 490. Выберите вторую камеру и измените псевдоцвет на зеленый. Введите смещение влево, а затем вправо по оси Z, полученное из подменю канала.
Выберите наименьший зум и точно настройте его для оптической четкости. Определите границу XY и диапазон Z для всего органа. Затем модулируйте интенсивность лазера и время экспозиции до менее чем 10 миллисекунд.
Запустите процесс, нажав кнопку Начать эксперимент. Если ткань слишком большая, объедините два или более изображений с помощью программного обеспечения для микроскопии. Откройте захваченный файл и выберите обработку.
Затем метод и сшивание, а затем параметр метода. Нажмите кнопку «Применить», чтобы завершить сшивку изображений. Для мечения клубочков использовали внутрисосудистый ввод нити fitindex.
В очищенной почке клубочки можно было четко наблюдать с помощью световой листовой микроскопии или конфокальной микроскопии.
