Встраивание одиночных клеток, полученных с помощью биопсии желудка, в купол матрицы базальной мембраны для генерации органоидов

Для начала снимите оттаявшую мембранную матрицу основания со льда. Добавьте рассчитанный объем матрицы базальной мембраны к отдельным клеткам, полученным при биопсии желудка, и осторожно перемешайте, пипетируя вверх и вниз в течение примерно 10 секунд. Затем с помощью пипетки быстро переносят 50 микролитров аликвот матрикса и клеточной смеси в центр отдельных лунок в 24-луночный планшет для культуры тканей.

Немедленно накройте тарелку и одним плавным движением переверните тарелку вверх дном. Поместите перевернутую пластину в инкубатор для культуры тканей с температурой 37 градусов Цельсия на 35 минут, чтобы матрица базальной мембраны полимеризовалась. Затем добавьте 500 микролитров предварительно разогретой желудочной органоидной среды в каждую лунку, убедившись, что верхняя часть каждого купола полностью погружена в среду.

Органоиды, как правило, идентифицируются в течение 10 дней после посева отдельных клеток. К 20-му дню они становятся большими, и, как правило, их необходимо пройти. Количество органоидов тела и антральных органов достигает максимума на 10-й день после посева, а затем уменьшается, хотя и незначительно.

Органоиды, полученные из ткани мантийной биопсии, показали большую скорость роста по сравнению с органоидами, полученными из ткани биопсии тела. У разных пациентов, как правило, наблюдалось разнообразие морфологии органоидов в любом отдельном куполе. Однако в среднем спастичность органоидов демонстрировала незначительные вариации.