Калибровка масс-спектрометра для скрининга липидов с мечением стабильными изотопами методом LC-TIMS-TOF MS/MS

Чтобы начать масс-спектрометр или калибровку MS для LC-TIMS-TOF-MS/MS, откройте управляющее программное обеспечение TIMS и на подвкладке калибровки нажмите на m/z, выберите подстроечный микс в Dropbox и нажмите «Калибровать» в правом нижнем углу. Продолжайте нажимать кнопку «Калибровка», пока не будет достигнут показатель 100 %. Теперь выберите вкладку «Мобильность» и выполняйте те же действия, что и на рисунке, пока не будет достигнут 100%-ный показатель калибровки.

Чтобы создать каждую точку калибровки на калибровочной кривой, добавьте в внутреннюю стандартную смесь липидов 10 микролитров дейтерированной внутренней стандартной смеси. Подготовьте семь таких образцов с шипами для семи точек калибровки в нужном диапазоне. Используя программное обеспечение для анализа данных, вручную аннотируйте цепи жирных кислот на основе пассивных паттернов MS/MS.

Чтобы определить мечение стабильных изотопов, или эффективность SIL, рассчитайте отношение площади SIL-содержащих изотопов к площади не-SIL-содержащих изотопов. Вычислите теоретическую закономерность, определив вероятность нахождения меченого атома в любом месте. Рассчитайте обогащение SIL, сопоставив экспериментальные профили изотопов с теоретической картиной, смоделированной в программном обеспечении для анализа данных.

Чтобы начать запуск, активируйте колонную печь, нажав кнопку термометра, и активируйте насосы, нажав кнопку клапана. Установите метод MS на соответствующий метод, сохраненный ранее. Убедитесь, что объем инъекции составляет пять микролитров, выровняйте один флакон мишени в соотношении 20 к одному, а затем сохраните список образцов.

Запустите последовательность и подтвердите успешное внедрение сообщением о внедрении, отображаемым в системе. Скопируйте первую строку и вставьте ее ниже, чтобы создать новую вторую строку. Заполните вторую строку образцами в зависимости от эксперимента.

Убедитесь, что используется правильное положение в автосамплере. Если подвижные фазы свежие, сначала проведите испытание формы пика со стандартами липидной смеси от производителя, чтобы сравнить его с предыдущими результатами. Липидная смесь и нормы отображаются на экране.

Убедитесь, что для новых линий используется правильный метод разделения, а не метод предварительной подготовки, используемый в первой линии. Убедитесь, что метод MS введен правильно. Убедитесь, что загружен правильный метод обработки и включен автоматизированный процесс запуска.

Сохраните список образцов, чтобы обеспечить анализ образцов после завершения текущего прогона.