Экстракция головного мозга мышей и диссекция субвентрикулярной зоны (СВЗ) для выделения нейральных стволовых клеток

Чтобы начать извлечение мозга из правильно усыпленной мыши, после отделения головы от остального тела, обнажите мозг, первоначально разрезав череп по сагиттальному шву. С помощью тонкого пинцета удалите косточки. Будьте осторожны, чтобы не повредить мозговую ткань под черепом во время этого шага.

С помощью шпателя аккуратно извлеките мозг из черепа. Поместите его в 12-луночную пластину, содержащую холодный фосфатный буферный раствор Дульбекко или DPBS. Далее перенесите весь мозг на силиконовую прокладку, где и будет происходить рассечение.

Используйте скальпель для удаления обонятельной луковицы, расположенной на ростральном конце мозга, и мозжечка, расположенного в зубчатой части, сохраняя при этом центральную часть мозга, содержащую оба боковых желудочка. Затем разделите мозг вдоль продольной щели на два полушария, прежде чем приступить к рассечению обоих полушарий по отдельности. Работая с одним полушарием, переориентируйте его так, чтобы медиальная область была обращена вверх.

Откройте мозг по линии мозолистого тела, отделив кору и стриатум от гиппокампа, перегородки и промежуточного мозга, тем самым обнажив боковые желудочки. Удалите гиппокамп, перегородку и головной мозг, следуя за вентральной границей желудочков. Затем удалите ткани за ростральный и початочный концы субвентрикулярной зоны или СВЗ, а также кору, следуя за мозолистым телом.

Наклоните ткань так, чтобы СВЗ была обращена вбок. Удалите стриарную ткань под SVZ, чтобы получить тонкий кусочек ткани, содержащий нейральные стволовые клетки. Храните оба препарированных SVZ от мыши в 12-луночной пластине, содержащей холодные DPBS, до обработки тканей.