Экспансия нейросфер, полученных из нейронных стволовых клеток мышиной субвентрикулярной зоны

Для проведения пассажа нейросфер, полученных из нейростволовых клеток, выделенных из субвентрикулярной зоны нейрона, соберите среду, содержащую нейросферы, из многолуночных планшетов и перенесите их в центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров. Центрифугируйте нейросферы в течение пяти минут при 300 G. После удаления надосадочной жидкости добавьте в гранулу 200 микролитров ферментативного раствора и осторожно постучите по дну пробирки, чтобы выбить ее. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре, чтобы облегчить диссоциацию нейросферы.

Затем добавьте один миллилитр контрольной среды, чтобы остановить ферментативную реакцию. Механически диссоциируйте нейросферы с помощью микропипетки P 1000 путем пипетирования вверх и вниз от 10 до 20 раз. Добавьте в дополнительный объем четыре миллилитра контрольной среды и перемешайте методом инверсии, чтобы промыть клетки.

Центрифугируйте клетки в течение пяти минут при 300 G перед удалением надосадочной жидкости. Добавьте один миллилитр готовой среды и повторно суспендируйте гранулу для гомогенизации клеточной суспензии путем пипетирования вверх и вниз 10 раз. После разбавления одной части аликвоты клеточной суспензии с одной частью трипанового синего подсчитывают клеточную суспензию с помощью камеры Нейбауэра.

Для размножения культуры засеивают клетки с плотностью 10 000 клеток на квадратный сантиметр с использованием готовой среды в соответствующей культуральной тарелке или колбе.