Совместное культивирование hSATMVEC и адипоцитов для исследования клеточных перекрестных разговоров у пациентов, перенесших имплантацию CIED

Для начала разморозьте один человеческий белый подкожный предадипоцит и добавьте клетки в колбу Т75, содержащую от 12 до 15 миллилитров теплой среды для роста преадипоцитов-2. После того, как клетки достигнут 90% конфлюенции, промойте их PBS и инкубируйте с одним миллилитром 0,25% раствора трипсина-ЭДТА в течение двух минут. С помощью светового микроскопа подтвердить отслойку клеток и добавить в клетки 23 миллилитра преадипоцитарной питательной среды-2.

Внесите по одному миллилитру клеточной суспензии в каждую лунку 24-луночного компаньона для совместной культуры и инкубируйте планшет для достижения слияния клеток. Затем замените среду одним миллилитром среды для дифференцировки преадипоцитов и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом в течение 10 дней. На шестой день дифференцировки засейте пять раз по 10 в степени четырех человеческих SAT MVEC в 500 микролитрах полной питательной среды MVEC на трансвеллированной вставке.

Поместите вкладыш в лунку, содержащую 500 микролитров полной питательной среды MVEC, и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом. На 10-й день, когда адипоциты полностью дифференцируются, удалите половину среды из каждой лунки и перенесите в каждую лунку трансволлезные вкладыши, содержащие confluence SAT MVEVs. Инкубируйте планшет в течение 24 часов для получения совместной культуры.

По мере того, как подкожные белые преадипоциты человека становятся более дифференцированными, можно заметить развитие липидных вакуолей.