Стандартизированная методология выявления и вскрытия жировых складов по всему телу имеет решающее значение для исследования различий в характере и функции адипоцитов в дискретных анатомических нишах. Основным преимуществом этой техники является то, что это надежный и точный метод для выявления и экскирования как общих, так и менее изученных грызунов жировых складов. Для идентификации и изоляции межкапулярного BAT используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы вырезать горизонтально вдоль нижнего края передней подкожной ткани усыпной мыши после естественной границы депо.
Сделайте два вертикальных разреза вдоль бокового края депо, следуя естественным границам ткани. Используйте типсы, чтобы тщательно перевернуть депо, чтобы выявить бабочки форме межкапулярной коричневой жировой ткани встроенных в белой жировой ткани. Затем тщательно вскрыть BAT от окружающих WAT.
Храните жировые ткани в соответствующих контейнерах для анализа ниже по течению. Для идентификации и изоляции задней подкожной WAT поместите мышь в положение на спине и защитите конечности животного. Используйте типсы, чтобы поднять кожу у основания грудины и сделать один миллиметр разреза кожи.
Вставьте одно лезвие ножниц радужной оболочки глаза в разрез и сделайте разрез средней линии от четырех до пяти сантиметров, начиная с основания грудины и поднимаясь к основанию хвоста. Затем сделайте два горизонтальных разреза на один сантиметр в верхней части первоначального вертикального разреза, простирающийся боковой от средней линии. Используйте типсы, чтобы тщательно очистить кожу от брюшной полости, использовать ногу, чтобы найти задний подкожный WAT, который должен оставаться связанным с кожей.
Прикрепите протянутую кожу и полностью акциз треугольной паховой WAT депо от основания задней вентралью через пах. Для висцеральной идентификации и изоляции депо WAT используйте типсы, чтобы поднять тонкую брюшную стенку полости у основания грудины и сделать разрез на один миллиметр в палаточной ткани. Вставьте одно лезвие ножниц радужной оболочки глаза в разрез и сделайте четыре-пять сантиметров спускаясь вертикальный разрез из верхней части брюшной полости в прямую кишку.
Сделайте два горизонтальных разреза на один сантиметр в верхней и нижней части вертикального разреза, простирающихся боковой от средней линии, и используйте типсы, чтобы очистить перитонеум, чтобы разоблачить содержимое брюшной полости. Затем прикрепите протянутую брюшную полость к сковороде для вскрытия, чтобы собрать склады WAT, содержащиеся в брюшной полости. Для идентификации и изоляции висцерального гонадал WAT, найти гонади и использовать типсы, чтобы поднять связанные гонадные WAT, а затем использовать ножницы радужной оболочки глаза, чтобы тщательно акциз WAT из гонад.
Чтобы подакцизовать периренальное депо, найдите почку и используйте миппы, чтобы поднять почечную ткань. Потяните почку к средней линии, чтобы увидеть четкое деление между периренальными и ретроперитонеальными складами и акцизом WAT, непосредственно связанным с почками. Затем удалите надпочечники, расположенные над почками, из WAT.
Для ретроперитонеальной идентификации и изоляции WAT, поднимите почку к средней линии снова и используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы тщательно вскрыть ретроперитонеальный WAT от задней перитонеальной стенки. Чтобы изолировать popliteal WAT, поместите коленную чашечку против вскрытия кастрюлю заботясь о том, что popliteal fossa в задней части колена сталкивается вверх. Используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы тщательно удалить кожу от основания задней к ноге.
Используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы сделать разрез на нижней границе медиальной и боковой головы мышцы гастрочнемиуса, использовать миппы, чтобы поднять мышцу, чтобы выявить треугольной popliteal депо. Затем используйте ножницы радужной оболочки глаза, чтобы подрезать депо вдоль естественных границ ткани. Здесь показаны грубые анатомические местоположения подкожных, коричневых, висцеральных и поплитальных складов мыши.
Гистологические характеристики подкожных, коричневых, висцеральных, поплитеральных, составных и регулируемых костных костов жировых, внутримышечных и инфрапателларовых жировых складов могут быть оценены стандартными протоколами окрашивания гематоксилина и эозина. Жировые ткани, изолированные с помощью этого протокола, могут быть использованы для широкого спектра экспериментальных конечных точек, включая гистологический анализ, молекулярные исследования, анализ экспрессии генов и белков. Полевая стандартизация идентификации различных жировых складов, несомненно, поможет нам в дальнейшем понять их молекулярные и метаболические характеристики и их дифференцированный вклад как в местные, так и в систематические патологические состояния.
