Для начала смешайте компоненты А и В полидиметилсилоксана, или PDMS, в соотношении 10 к одному. Хорошенько перемешав смесь, перелейте смесь в мастер-форму. Поместите форму PDMS под давление один фунт на квадратный дюйм на 15 минут, чтобы удалить пузырьки воздуха.
Отверждите форму PDMS при температуре 60 градусов Цельсия в течение двух часов. Извлечение из формы для получения производственной формы микроиглы. Затем очистите производственную форму сверхчистой водой перед использованием.
Количественно оцените содержание белка в приготовленном растворе экзосом с помощью набора для анализа BCA. Добавьте соответствующее количество DPBS в раствор экзосомы. Теперь приготовьте раствор из 200 мг на миллилитр трегалозы, используя DPBS в качестве растворителя.
Помешивайте в течение 20 минут, чтобы обеспечить полное растворение. Далее приготовьте раствор гиалуроновой кислоты и поливинилпирролидона, или ПВП, используя в качестве растворителя DPBS и этанол соответственно. Перемешайте в течение ночи, чтобы обеспечить полное растворение.
Смешайте раствор экзосомы и раствор трегалозы в равном соотношении. Добавьте равный объем раствора гиалуроновой кислоты и тщательно перемешайте до получения кончика раствора. Используя плазменный очиститель, обработайте поверхность формы PDMS в течение 30 секунд при низком уклоне, чтобы повысить ее гидрофильность.
Добавьте 40 микролитров раствора наконечника в форму PDMS. Центрифугируйте при температуре 3 000 г в течение трех минут при комнатной температуре, чтобы жидкость заполнила слой иглы формы. Удалите лишнюю жидкость из формы и высушите при комнатной температуре в вакуумной сушильной печи в течение одних суток.
Затем добавьте 200 микролитров раствора ПВП в форму PDMS. Центрифугируйте при температуре 3 000 г в течение трех минут при комнатной температуре, чтобы жидкость заполнила подкладочный слой формы. После сушки формы в течение одного дня извлеките из формы, чтобы получить пластырь микроиглы, загруженный экзосомами.
