Получение мозжечковых органотипических культур для исследования реакции на повреждение ДНК в клетках Пуркинье

Для начала получите мозжечок от 10-дневного щенка мыши в холодном буфере для препарирования. После удаления лишнего буфера расположите мозжечок на режущей платформе в вертикальной ориентации. Проводят парасагиттальную нарезку при толщине среза 350 мкм.

Аккуратно разделите ломтики тонким шпателем для радужки и поместите их в холодную среду для рассечения. Под бинокль с помощью двух изогнутых шпателей радужки аккуратно отделите срезы тканей друг от друга. Для культур используйте срезы, полученные из червей мозжечка, расположенных в медиальной кортикоядерной зоне органа.

С помощью широкого шпателя перенесите каждый срез ткани на вкладыш для культуры. Переместите каждую вставку, содержащую срез ткани, в лунку в шестилуночном планшете, содержащем предварительно нагретую среду. Во время инкубации отсасывайте использованную среду с помощью стерильной стеклянной пипетки.

С помощью серологической пипетки объемом пять миллилитров добавьте один миллилитр свежего базального среднего орла, прислонив кончик пипетки к стенке лунки, не повреждая ткани.