Иммуноокрашивание и автоматизированный подсчет ганглиозных клеток сетчатки мыши с помощью программы на основе искусственного интеллекта

После выделения всего крепления сетчатки от мыши, промойте сетчатку в PBS с легким помешиванием в течение пяти минут. Погрузите отмытую сетчатку в блокирующий буфер на 30 минут. После инкубации замените блокирующий буфер первичным антителом BRN3A.

Инкубируйте сетчатку в течение ночи при температуре четыре градуса Цельсия, чтобы обеспечить связывание специфических антигенных антител. На следующий день трижды промойте сетчатку PBS в течение пяти минут каждый, прежде чем инкубировать с конъюгированным вторичным антителом против кролика Alexa 594 или Alexa 488 в течение двух часов для визуализации целевых антигенов. После промывания иммуноокрашенной сетчатки PBS аккуратно перенесите ее на предметное стекло микроскопа.

Сделайте сетчатку плоской, чтобы свести к минимуму складчатость или искажение. Поместите защитную накладку на сетчатку, чтобы не образовывались пузырьки воздуха. Скачайте код по ссылке GitHub.

Затем скачайте необходимые файлы с облачного диска и распакуйте их. Найдите конфигурацию. ini и измените его содержимое так, чтобы оно указывало на yolov5_cpu путь.

Затем нажмите на «Пользовательский интерфейс». exe для открытия графического интерфейса. Проверьте, является ли pmse_plus.

pt model file находится в корневом каталоге диска C. Если нет, скопируйте его из папки weights папки yolov5. Откройте программу для подсчета ячеек. Нажмите «Открыть изображение», чтобы импортировать изображение, затем нажмите «Выполнить», чтобы разрешить программному обеспечению автоматически подсчитывать ячейки.

Программное обеспечение для автоматического подсчета клеток точно идентифицировало 15 231 ганглиозные клетки сетчатки в мышиной модели глаукомы, вызванной N-метил-D-аспартатом, демонстрируя значительную потерю клеток по сравнению с примерно 45 000 до 50 000 RGC в нормальной сетчатке.