Рисунки 1 и 2 были ранее опубликованы в Free Radical Biology &amp; Medicine (Queliconi соавт. 5) и имеют Авторское право принадлежит Elsevier. Эта работа была поддержана Fundação де Ампаро à Pesquisa сделать Estado де Сан-Паулу (FAPESP), Национальным институтом Ciencia электронной Tecnologia де Processos Редокс ет Biomedicina, в Nucleo де Apoio à Pesquisa де Processos Редокс эм Biomedicina, USPHS NS064945 (KN) и USPHS GM087483 (KN ). Барбекю является докторант поддерживается общение FAPESP.

1. С. Элеганс Рост <ol><li> Подготовка 35 мм нематода Рост СМИ (NGM) агаром засевают OP50 бактерий, как в стандартных методов выращивания 1. </li><li> Синхронизация С. Элеганс путем размещения 6 взрослых беременной на сеяной NGM пластины. Удалить взрослых после ~ 100 яйца были заложены (~ 3 ч). </li><li> Инкубируйте пластин течение 3 дней при 20 ° С, после чего черви разработали для молодой взрослой стадии и оптимальных для данного эксперимента. Альтернативные протоколы для синхронизации C. Элеганс описаны в других 10. </li></ol> 2. Материалы для AS <ol><li> M9 буфера (22 мМ KH 2 PO 4, 42 мМ Na 2 HPO 4, 86 мМ NaCl, 1 мМ MgSO 4) должны быть очищены кислорода уравновешивания с N 2 (аргон также могут быть использованы) в течение 30 мин до эксперимента и выдерживают в окружении льда. </li><li> Сделайте небольшое отверстие (3 ммв ширину) в крышке 1,5 мл микропробирок, в котором будут размещены черви во AS. Отверстие позволяет газообмена, не держа крышку открытой, так как это может привести к чрезмерному испарению СМИ. </li></ol> 3. Аноксия / Голод <ol><li> Проведение всех экспериментах по крайней мере в трех экземплярах. </li><li> Добавьте 1 мл РТ, кислородом буфер M9 каждому 35 мм пластины, содержащей молодых взрослых червей, выращенных как описано выше. Будьте осторожны, чтобы избежать удаления бактерий из пластины (добавить M9 к краям, где бактерии не были посеяны). После ~ 1 мин черви должны быть купание в M9. </li><li> Пальто с пипетки 1 мл с BSA с помощью пипетки и изгнав стерильный 1% раствор BSA. </li><li> Осторожно наклонить пластину, содержащую червей в M9 буфера, удалите M9 с того же места, где он был добавлен, и поместите подвеску в подготовленных микропробирок. Пусть отдых в лед, пока черви не упали на дно трубок (~ 1-2 Мин). </li><li> Удалить максимальное количество M9 возможное, не нарушая червей из трубки (оставляя вокруг 100 мкл), добавить 1 мл кислорода продутую и льдом M9 и поместите трубку на льду до черви не оседают на дно снова. Повторите последний шаг 3 раза. В последней промывки, удалите M9 до ~ 100 мкл не остается в трубке. </li><li> Поместите пробирки с червями в венозная M9 внутри бескислородной / гипоксического камеры (см. инструкции ниже, раздел 3.6.1) или, наоборот, в пользовательских закрытой посуде (см. инструкцию ниже, раздел 3.6.2). <ol><li> Если коммерческий бескислородной / гипоксическая камера будет использоваться, оставить немного очищенный M9 внутри камеры перед началом шаг 3,5 и повторите шаг 3,5 раз черви внутри камеры. </li><li> Если пользовательский камера должна быть использована, подробное описание того, как создать устройство дешевое представлена ​​в конце этого протокола и был описан ранее другой группой 11. Кратко: <ol&gt; <li> Сделайте два отверстия в крышке 250 мл Tupperware типа контейнера и добавить разъемы трубки им. Один будет использоваться для введения газовой смеси, а другой будет выхода газа в водяной бане. </li><li> Поместите червей в камеру и уплотнения камеры с использованием крышку. </li><li> Газ с постоянной N 2 потока (100 мл / мин). </li><li> Поместите контейнер внутри водяной бане при 26 ° С. Убедитесь, что выпускная труба хорошо погружен в воду таким образом, никакие воздушные возвращается, и что нет никаких утечек в системе (видимой пузырьками, вытекающих из самой камеры). </li></ol></li></ol></li><li> Инкубируйте червей при 26 ° С в течение 20 часов. </li></ol> 4. Имитация Реперфузия <ol><li> После 20 часов в условиях, удалите трубки от инкубационной камере в комнатном воздухе. </li><li> Внесите С. Элеганс с наконечником BSA покрытием (как в шаге 3.3) на на OP50 высевают 35 мм NGM пластины. Инкубируйте пластин при 20 ° С в течение 24 часов.После этого, черви будут готовы забито. </li></ol> 5. Выявление Dead Versus живых червей <ol><li> Использование платины выбор, следует нажать на верхнюю часть головы червя. Живые черви двигаться в обратном направлении после того, как коснулся. Если черви нечувствительность, забить, как мертвый. Иногда, червь не будет двигаться в обратном направлении, но может проявлять небольшую стороны в сторону движения головы. Хотя технически не мертв, эти черви почти наверняка истекает в течение нескольких часов, и должен быть засчитан, как мертвый. Если один ждет слишком долго, чтобы забить червей, внутренняя штриховка потомства может произойти и эти &quot;мешки-из-червей&quot; может привести к разрыву, что делает обнаружение туши очень сложно. </li><li> Снять оба живые и мертвые червей от пластины, как они подсчитываются, чтобы избежать дубликатов пунктам. Живые черви могут быть перемещены в отдельную тарелку для выполнения поведенческих анализов. Количество живых червей по отношению к общей представлено в виде% от выживших червей (Фиг.1А </stРонг&gt;). </li></ol> 6. Прикоснитесь Пробирной Response <ol><li> Подробное описание этого протокола была представлена ​​в Харт, Энн С., под ред. Поведение (3 июля 2006), WormBook, изд. С. Элеганс Научно-исследовательское сообщество, WormBook, doi/10.1895/wormbook.1.87.1, http://www.wormbook.org. <ol><li> Чтобы забить для сенсорного ответ, определить червей, которые двигаются и слегка касались сторону головы червя (около средней части глотки) с ресниц киркой (рис. 3). </li><li> Если червь движется назад, набрать как можно реагировать, если нет, то набрать как нечувствительность (рис. 1В). Повторите этот шаг 10-15x для каждого червя с 10-секундными интервалами. Зонд не менее 10 червей в каждой группе, чтобы иметь точные данные. То же анализ может быть использован для оценки изменений вперед локомоторных следующее легкое прикосновение к задней стенке кузова. Будьте уверены, чтобы не коснуться головы или хвоста червя, так как это стимулирует явное поведение. </li><li> Наконец, вкорпоративные штаммы генетического контроля [N2 Бристоль дикого типа для положительного, тес (механосенсорных) мутанта за негативное - например CB1338 тес-3 (e1338) IV] для калибровки сила, с которой трогать червей. Слишком суровая из стимуляции будет вызывать поведенческую реакцию в MEC мутантов, слишком мало не будет вызывать эффект в дикого типа N2 управления. </li></ol></li></ol> 7. Нейронов Модификации <ol><li> Для визуализации пост, как нейронные модификаций, использовать штамм, которая выражает GFP в сенсорных отвечая MEC нейронов 4,5. Эти нейроны имеют длинные процессы, которые запускаются вместе стенки тела и легко забил за морфологических аномалий. Кроме того, морфологический информация может быть интегрирована с поведенческими мерами функции нейронов, как описано выше. Один штамм, который может быть использован для этой цели является TU2583, который доступен от С. Элеганс-генетический центр и содержит uIs25 интегрированный трансген, выразив GFP сюдам в тес-18 промотор, или в качестве альтернативы TU2562, в котором содержится комплексный тес-3 :: GFP синтеза. </li><li> Подготовка агарозном площадку. <ol><li> Растопить 2% агарозы в воде, довести до 1x M9 с 10-кратным складе, и поддерживать решение при 70 ° С </li><li> Поместите каплю (~ 20 мкл) этого раствора на предметное стекло (25 мм х 75 мм), который был размещен между двумя другими горками, каждый из которых имеет один кусок ленты на их нижней стороне. </li><li> Поместите окончательного предметное стекло перпендикулярно первому на верхней части 2%-ного раствора агарозы, и дайте ему остыть при комнатной температуре. Это должно образуют прокладку, которая толщина ленты. </li><li> Снимите верхнюю слайд и добавить 10 мкл M9, содержащие 0,1% tetramisole, которые будут иммобилизации червей. </li></ol></li><li> Перемещение некоторых (~ 10) жить червей на 2% агарозном слайда. Поместите покровное над ними и визуализировать GFP с помощью флуоресцентного микроскопа под цели 100X с соответствующим освещением. </li><li> Поврежденныйнейроны покажет цитозольный мембраны нитка жемчуга узором в процессах, состоит из нескольких Punctum (рис. 2А), и / или аномалии, где процессы в виде прерывистых (рис. 2В). Всего Punctum и аномалии в обоих нейронов для каждого червя, используя в общей сложности не менее 10 червей. </li></ol> 8. Лаборатория производства Гипоксическая палата <ol><li> Tupperware стиле, закрывающийся, герметичный контейнер может быть модернизации в качестве бескислородной камере. Позаботьтесь, чтобы выбрать контейнер, который, как малые, как это осуществимо. Небольшой контейнер создает гипоксического среду быстрее и легче, чтобы уместиться в водяной бане (рис. 4). </li><li> Сделать два отверстия на крышке (может быть сделано с помощью отвертки или нагреванием щипцы и заставляя в крышку) и вставить из пластмассы или металла разъем, который подходит трубки (рис. 5А). Используйте клей, который может быть размещен под водой, а также получает жесткий после сушки, избегая движенияразъем и, следовательно, снижает вероятность утечки (рис. 5б). </li><li> Контейнер должен быть помещен в водяной бане так, чтобы он полностью погружен в воду (рис. 4). Чтобы погрузить контейнер, использовать вес бутылки или вес дайвинг. </li><li> Один из соединений трубопроводов будет использоваться для введения газовой смеси, а другой труба будет действовать как сброса давления, следовательно, он должен быть оставлен под водой, так что контейнер изолирован от внешней среды (рис. 4). </li><li> Состав воздуха можно модулировать с помощью на заказ газ, Регуляторы расхода газа или любую аппаратуру, которая смешивает нужные газы. Поток газа должны контролироваться, как высокий расход может создать чрезмерное испарение. Например, в контейнере 250 мл, 100 мл / мин газообразного будет обеспечивать хорошее место для червей и подходящий поток. </li><li> Длина трубки должна быть сведена к минимуму, так как они могут быть проницаемыми для газ,llowing вход O 2. Важно, чтобы избежать использования силикон, Tygon трубки, эти материалы являются проницаемыми для газообмена. Мы предпочитаем полипропиленовые или нейлоновые трубки. Стекла или металла труб поддерживать газы хорошо, но также сложнее работать. </li></ol>

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Maine, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+gene+function+in+Caenorhabditis+elegans+using+RNA-mediated+interference.">Studying gene function in Caenorhabditis elegans using RNA-mediated interference.</a> Briefings Funct. Genom. Proteom. 7 (3), 184-194 (2008).</li><li>Vanden Hoek, ., L, T., Shao, Z., Li, C., Zak, R., Schumacker, P. T., Becker, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+injury+on+cardiac+myocytes+after+simulated+ischemia.">Reperfusion injury on cardiac myocytes after simulated ischemia.</a> Am. J. Physiol. 270 (4), 1334-1341 (1996).</li><li>Ba Scott, ., Avidan, M. S., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+hypoxic+death+in+C.+elegans+by+the+insulin/IGF+receptor+homolog+DAF-2.">Regulation of hypoxic death in C. elegans by the insulin/IGF receptor homolog DAF-2.</a> Science. 296 (5577), 2388-2391 (2002).</li><li>Queliconi, B. B., Marazzi, T. B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bicarbonate+modulates+oxidative+and+functional+damage+in+ischemia-reperfusion.">Bicarbonate modulates oxidative and functional damage in ischemia-reperfusion.</a> Free Rad. Biol. Med. 55, 46-53 (2013).</li><li>Wojtovich, A. P., DiStefano, P., Sherman, T., Brookes, P. S., Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+ATP-sensitive+potassium+channel+activity+and+hypoxic+preconditioning+are+independent+of+an+inwardly+rectifying+potassium+channel+subunit+in+Caenorhabditis+elegans.">Mitochondrial ATP-sensitive potassium channel activity and hypoxic preconditioning are independent of an inwardly rectifying potassium channel subunit in Caenorhabditis elegans.</a> FEBS Lett. 586 (4), 428-434 (2012).</li><li>Dasgupta, N., Patel, A. M., Scott, B. A., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic+Preconditioning+Requires+the+Apoptosis+Protein+CED-4+in+C.+elegans.">Hypoxic Preconditioning Requires the Apoptosis Protein CED-4 in C. elegans.</a> Curr. Biol. 17 (22), 1954-1959 (2007).</li><li>Jia, B., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volatile+anesthetic+preconditioning+present+in+the+invertebrate+Caenorhabditis+elegans.">Volatile anesthetic preconditioning present in the invertebrate Caenorhabditis elegans.</a> Anesthesiology. 108 (3), 426-433 (2008).</li><li>Wojtovich, A. P., Sherman, T. A., Nadtochiy, S. M., Urciuoli, W. R., Brookes, P. S., Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLO-2+is+cytoprotective+and+contributes+to+mitochondrial+potassium+transport.">SLO-2 is cytoprotective and contributes to mitochondrial potassium transport.</a> PloS One. 6 (12), e28287 (2011).</li><li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cer&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Caenorhabditis+elegans+methods:+synchronization+and+observation.">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019 (2012).</li><li>Fawcett, E. M., Horsman, J. W., Miller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creating+defined+gaseous+environments+to+study+the+effects+of+hypoxia+on+C.+elegans.">Creating defined gaseous environments to study the effects of hypoxia on C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (65), e4088 (2012).</li><li>Butler, J. A., Mishur, R. J., Bokov, A. F., Hakala, K. W., Weintraub, S. T., Rea, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+the+anaerobic+response+of+C.+elegans+using+GC-MS.">Profiling the anaerobic response of C. elegans using GC-MS.</a> PLoS One. 7 (9), 10-1371 (2012).</li><li>Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dephosphorylation+of+cell+cycle-regulated+proteins+correlates+with+anoxia-induced+suspended+animation+in+Caenorhabditis+elegans.">Dephosphorylation of cell cycle-regulated proteins correlates with anoxia-induced suspended animation in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (5), 1473-1483 (2002).</li><li>Jiang, H., Guo, R., Powell-Coffman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+hif-1+gene+encodes+a+bHLH-PAS+protein+that+is+required+for+adaptation+to+hypoxia.">The Caenorhabditis elegans hif-1 gene encodes a bHLH-PAS protein that is required for adaptation to hypoxia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (14), 7916-7921 (2001).</li><li>Twumasi-Boateng, K., Wang, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+age-dependent+reversal+in+the+protective+capacities+of+JNK+signaling+shortens+Caenorhabditis+elegans+lifespan.">An age-dependent reversal in the protective capacities of JNK signaling shortens Caenorhabditis elegans lifespan.</a> Aging Cell. 11 (4), 659-667 (2012).</li><li>Wang, Y., Chen, J., Wei, G., He, H., Zhu, X., Xiao, T., Yuan, J., Dong, B., He, S. S. k. o. g. e. r. b. &. #. 2. 4. 8. ;. G., Chen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+intermediate-size+transcriptome+shows+high+degree+of+stage-specific+expression.">The Caenorhabditis elegans intermediate-size transcriptome shows high degree of stage-specific expression.</a> Nucleic Acids Res. 39 (12), 5203-5214 (2011).</li><li>Perry, C. N., Huang, C., Liu, W., Magee, N., Carreira, R. S., Gottlieb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenotransplantation+of+mitochondrial+electron+transfer+enzyme,+Ndi1,+in+myocardial+reperfusion+injury.">Xenotransplantation of mitochondrial electron transfer enzyme, Ndi1, in myocardial reperfusion injury.</a> PloS One. 6 (2), e16288 (2011).</li><li>Chai, Y., Li, W., Feng, G., Yang, Y., Wang, X., Ou, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Cellular+Dynamics+During+Caenorhabditis+elegans+Postembryonic+Development.">Live Imaging of Cellular Dynamics During Caenorhabditis elegans Postembryonic Development.</a> Nature Protoc. 7 (12), 2090-2102 (2012).</li><li>Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reduction+in+intestinal+cell+pHi+due+to+loss+of+the+Caenorhabditis+elegans+Na+/H++exchanger+NHX-2+increases+life+span.">A reduction in intestinal cell pHi due to loss of the Caenorhabditis elegans Na+/H+ exchanger NHX-2 increases life span.</a> J. Biol. Chem. 278 (45), 44657-44666 (1074).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Как уже широко используется в С. Элеганс по моделированию ИК травмы. Некоторые ключевые моменты должны быть выделены для этого протокола: C. Элеганс устойчивы к широкому кругу травм, обосновывая необходимость 3 сопутствующих оскорблений (тепло, голодном и гипоксия) для достижения смерть с помощью этой системы. Одна Аноксия не убивает червей в этом окне времени 14. Кроме того, повышение температуры дополнительный стресс, поэтому важно внимательно следить. Строго говоря, голод не вносит значительного вклада со степенью смертности наблюдается 7, по существу, но это, кажется, уменьшает изменчивость среди экспериментальных повторах. Учитывая, что не может быть значительные колебания от изо дня в день, крайне важно, чтобы сравнить образцы запускаются прямо параллельно, и повторить эксперименты на нескольких дней. В общем, результаты измеряются в течение трех отдельных пластин 50-100 червей / экспериментальных условиях, и онин среднем и считается одной экспериментальной репликации. Как правило, от семи до девяти повторов, как представляется, достаточно для достижения или исключить статистической значимости. Стадия развития червей, используемых в эксперименте также должна быть тщательно проверены как восприимчивости разных этапах как повреждения значительно 15,16 меняется. Использование молодых людей является стандартным, и личиночной стадии (L3 и L4) червей, кажется, более устойчивы к разрушающему воздействию AS (неопубликованные данные). Этот протокол представляет два пути для выполнения экспериментов, один с помощью лабораторного производства аппарата (используя Tupperware типа контейнеров и подачу газа 11) и другие, используя коммерческий гипоксического камеру 4,6. Anoxia может быть достигнуто с помощью других средств, которые потребляют кислород, как описано в другом месте 13,17. Использование альтернативных методов для создания гипоксических окружающей среды может изменить как инкубация время, необходимоечтобы создать нужное количество смерти. Ориентация ~ 20% выживаемости является идеальной отправной точкой для изучения защитных мер, в то время как 80% является так же идеально подходит для мероприятий, которые усугубляют негативные последствия AS. Еще один важный нюанс является время, в которое набирает наблюдателей мертвые / жив черви. Если время для анализа расширяется за пределы 24 часов, данные могут вводить в заблуждение, так как мертвые черви становятся все более трудно определить. Это может быть связано с червь туши становится относительно прозрачной в течение долгого времени, но и с тем, что оплодотворенные эмбрионы могут перерасти в потомства вскрытии внутри туши и нарушить их по мере их появления. Анализ морфологии нейронов могут быть изменены, чтобы посмотреть на паттернов экспрессии белка 18, ядерной фрагментации 4 и других параметров 19, заменяя червь штамма, который экспрессирует соответствующий генетически закодированного маркер. И последнее предостережение, что визуализациянейронные процессы должно быть сделано не более 30 мин после размещения червей на слайде. Животных, содержащихся под наркозом на слайдах для более длительные сроки могут проявлять AS-независимый ущерб. Отрегулируйте количество животных на слайд в зависимости от времени, необходимого для отслеживания и анализа их.

С. Элеганс является нематода, которая была широко принята в качестве многоклеточного эукариотической модельного организма с момента ее введения по Бреннер 1. Это дешевый, простой и универсальной моделью, которая позволяет легко связи между генетическими изменениями и фенотипических изменений 2. Ишемия характеризуется отсутствием питательных веществ и подачи кислорода к ткани, с последующей реперфузией, когда взрыв активных форм кислорода производится 3 и в большинстве случаев ущерб. В 2002 году модель ишемии / реперфузии (ИК) в С. Элеганс был разработан 4 с участием представления весь червя аноксии, питательной лишений и теплового стресса в течение примерно 20 часов с последующим 24 часов при нормальных условиях. Хотя эта модель технически гипоксия-голодание (АС) состояние, гибель клеток происходит с помощью механизмов, которые сохраняются у млекопитающих, в том числе повреждений, вызванных окислителями при реперфузии &lt;SUP&gt; 5. Кроме того, похоже на ИК млекопитающих, повреждение индуцируется как в C. Элеганс можно предотвратить путем предварительной ишемической 6,7 или анестезирующего предварительной 8,9. Приведенные ниже протоколы показывают, как имитировать ИК в С. Элеганс с использованием модели AS, как забить морфологические и поведенческие отклонения, возникающие в результате AS, и как адаптировать протокол таким образом, что позволяет эксперимент будет проводиться с меньшей первоначальных инвестиций, используя изготовленный на заказ, легко-построенную камеру альтернативу .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1146">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">N2&#160; strain</td>
			<td style="width:269px;">CGC (http://www.cbs.umn.edu/CGC/)</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:453px;">Wild type strain</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">TU2583 uIs25 (Pmec-18::GFP)</td>
			<td style="width:269px;">CGC (http://www.cbs.umn.edu/CGC/)</td>
			<td style="width:208px;">TU2583</td>
			<td style="width:453px;">integrated fluorescent transgene used to label touch neurons</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CB1338 mec-3 (e1338)IV</td>
			<td style="width:269px;">CGC (http://www.cbs.umn.edu/CGC/)</td>
			<td style="width:208px;">CB1338</td>
			<td style="width:453px;">canonical mec-3 mutant that is touch insensitive</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Microcentrifuge Tube</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">0030 120.086</td>
			<td style="width:453px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:216px;">Nikon Eclipse TE2000-U Microscope&#160;</td>
			<td style="width:269px;">Nikon USA</td>
			<td style="width:208px;">TE2000-U</td>
			<td style="width:453px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Low Temperature Incubator</td>
			<td style="width:269px;">Sheldon Manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:208px;">Model 2005</td>
			<td style="width:453px;"></td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Eyelash Pick</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:453px;">An eyelash pick can be prepared by attaching&#160; an eyelash onto a wooden toothpick, then attaching the toothpick in a glass Pasteur pipette (Figure 3)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Hypoxic Chamber</td>
			<td style="width:269px;">Coy</td>
			<td style="width:208px;">8307030</td>
			<td>Hypoxic Glove box equipped with paladium catalyst and CO2 controller.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an anoxia-starvation model for ischemia/reperfusion in c. elegans

Протоколы для аноксии / голода в генетическая модель организма C. Элеганс имитировать ишемии / реперфузии. Черви отделены от бактериальной пищи и помещен под аноксии в течение 20 часов (имитация ишемия), а затем переехал в нормальной атмосфере с пищей (имитация реперфузии). Это экспериментальные результаты парадигма в повышенной смертности и повреждения нейронов и методов представлены для оценки жизнеспособности организма, изменения в морфологии сенсорный нейрон процессов, а также чувствительность клавиатуры, который представляет собой поведенческий выход функции нейронов. Наконец, метод построения гипоксические инкубаторы использовании контейнеров общая кухня хранения описывается. Добавление блока управления массового расхода позволяет изменения должны быть внесены в газовой смеси в пользовательских инкубаторов, и ванна с циркулирующей водой позволяет как контроль температуры и позволяет легко определить утечки. Этот метод обеспечивает недорогую альтернативу коммерческиединиц измерения.

Подвергая C. Элеганс до 20 часов по состоянию на 26 ° С в пользовательском лабораторного производства инкубационного камере, как описано (раздел 3.6.2) привели к значительному смертности (рис. 1А) 5. После люминесцентные визуализации Punctum и перерывов в GFP помечены нейронных процессов выживших подтвердили наличие морфологических аномалий (рис. 2). Оставшиеся в живых также ответил на прикосновения неточно света стенки тела (рис. 1В). Эта модель была использована несколько групп, чтобы изучить, как генетическая предрасположенность, фармацевтической вмешательство, и метаболический пластичность влияет как зависимые результаты 4-6,8,9,12,13. <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig1.jpg" /> Рисунок 1. С. Элеганс ответ выживание и сенсорный послеAS.) Процент червей, которые обладают 24 ч после AS выживания. Штамм N2 является генетический фон дикого типа, и KWN85 содержит интегрированный трансген, задающий заголовок MEC нейроны с GFP. B) ответ прикоснуться стимулы живых C. Элеганс (N2 Процедить) А.С.. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51231/51231fig1highres.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> <img alt="Рисунок 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig2.jpg" /> Рисунок 2. Сенсорный нейрон изменения А.С.. Сенсорный нейрон (PLML и PLMR) нарушения, такие как извилистых процессов и перерывов (A) или накопление GFP агрегатов в процессах (В) были проверены в сохранившихся анестезии С. eleg<html> ответ А.С.. <img alt="Рисунок 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig3.jpg" /> Рисунок 3. Ресницы выбор. Собраны ресниц выбор. На вставке, деталь ресницы приклеены к зубочистки дерева. <img alt="Рисунок 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig4.jpg" /> Рисунок 4. Лаборатория производства гипоксическая камера внутри водяной бане. Закрытый контейнер готов начать эксперимент. Стрелки указывают вход газа и выход и вес бутылки используется, чтобы она не плывет. 231fig5.jpg &quot;/&gt; Рисунок 5. Подробная информация о внутренней и внешней стороне крышки контейнера. A) внешней стороне крышки контейнера, что указывает на трубу и ее разъем прикреплен к предварительно полученным отверстие. B) внешней стороне крышки контейнера, что указывает на Патрубок прикрепленный к предварительно полученным отверстие.

Watch this Scientific Journal Video about An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans at JoVE.com

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Протокол описано, что использует аноксии / голодание в С. Элеганс по моделированию ишемии / реперфузии. Функциональные результаты включают повышенную смертность, видимые отклонения в GFP-меченых нейронов процессов, и нарушение поведенческих реакций, которые требуют функции нейронов.

Аноксия-голодание модель ишемии / реперфузии в<em&gt; С. Элеганс</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

an-anoxia-starvation-model-for-ischemiareperfusion-in-c-elegans

Research

JoVE Journal

Biology

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

9.8K Views.  Universidade de São Paulo.  Протокол описано, что использует аноксии / голодание в С. Элеганс по моделированию ишемии / реперфузии. Функциональные результаты включают повышенную смертность, видимые отклонения в GFP-меченых нейронов процессов, и нарушение поведенческих реакций, кото...

Video: An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Imaging C. elegans Embryos using an Epifluorescent Microscope and Open Source Software

Cellular processes, such as chromosome assembly, segregation and cytokinesis,are inherently dynamic. Time-lapse imaging of living cells, using fluorescent-labeled reporter proteins or differential interference contrast (DIC) microscopy, allows for the examination of the temporal progression of these dynamic events which is otherwise inferred from analysis of fixed samples1,2. Moreover, the study of the developmental regulations of cellular processes necessitates conducting time-lapse experiments on an intact organism during development. The Caenorhabiditis elegans embryo is light-transparent and has a rapid, invariant developmental program with a known cell lineage3, thus providing an ideal experiment model for studying questions in cell biology4,5and development6-9. C. elegans is amendable to genetic manipulation by forward genetics (based on random mutagenesis10,11) and reverse genetics to target specific genes (based on RNAi-mediated interference and targeted mutagenesis12-15). In addition, transgenic animals can be readily created to express fluorescently tagged proteins or reporters16,17. These traits combine to make it easy to identify the genetic pathways regulating fundamental cellular and developmental processes in vivo18-21. In this protocol we present methods for live imaging of C. elegans embryos using DIC optics or GFP fluorescence on a compound epifluorescent microscope. We demonstrate the ease with which readily available microscopes, typically used for fixed sample imaging, can also be applied for time-lapse analysis using open-source software to automate the imaging process.

Imaging C. elegans Embryos using an Epifluorescent Microscope and Open Source Software

The C. elegans embryo is a powerful system for studying cell biology and development. We present a protocol for live imaging of C. elegans embryos utilizing DIC optics or fluorescence using readily available epifluorescent microscopes and open-source software.

Изображений С. Элеганс Эмбрионы использованием Epifluorescent Микроскоп и открытое программное обеспечение

Cellular processes, such as chromosome assembly, segregation and cytokinesis,are inherently dynamic. Time-lapse imaging of living cells, using ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

Основной<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em&gt; Методы синхронизации и наблюдения

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates. Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis behavior.
 The premise behind testing the response of the worms to an odorant is to place them in an area and observe the movement evoked in response to an odorant. Even with the many available assays, optimizing worm starting location relative to both the control and test areas, while minimizing the interaction of worms with each other, while maintaining a significant sample size remains a work in progress 1-10. The method described here aims to address these issues by modifying the assay developed by Bargmann et al.1. A Petri dish is divided into four quadrants, two opposite quadrants marked "Test" and two are designated "Control". Anesthetic is placed in all test and control sites. The worms are placed in the center of the plate with a circle marked around the origin to ensure that non-motile worms will be ignored. Utilizing a four-quadrant system rather than one 2 or two 1 eliminates bias in the movement of the worms, as they are equidistant from test and control samples, regardless of which side of the origin they began. This circumvents the problem of worms being forced to travel through a cluster of other worms to respond to an odorant, which can delay worms or force them to take a more circuitous route, yielding an incorrect interpretation of their intended path. This method also shows practical advantages by having a larger sample size and allowing the researcher to run the assay unattended and score the worms once the allotted time has expired.

C. elegans Chemotaxis Assay

A method of quantitatively evaluating the chemotactic response of Caenorhabditis elegans is described. A chemotactic index (CI) was employed as a way to precisely evaluate the response of worms to certain targets, and serve as a platform of comparison between strains and compounds of interest.

C. Элеганс Анализ хемотаксиса

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require direct access to cells and isolation of specific cell types, could not be applied in C. elegans. This limitation was due to the fact that tissues are confined within a pressurized cuticle which is not easily digested by treatment with enzymes and/or detergents. Based on early pioneer work by Laird Bloom, Christensen and colleagues 1 developed a robust method for culturing C. elegans embryonic cells in large scale. Eggs are isolated from gravid adults by treatment with bleach/NaOH and subsequently treated with chitinase to remove the eggshells. Embryonic cells are then dissociated by manual pipetting and plated onto substrate-covered glass in serum-enriched media. Within 24 hr of isolation cells begin to differentiate by changing morphology and by expressing cell specific markers. C. elegans cells cultured using this method survive for up 2 weeks in vitro and have been used for electrophysiological, immunochemical, and imaging analyses as well as they have been sorted and used for microarray profiling.

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

We describe here a revised protocol for large-scale culture of embryonic C. elegans cells. Embryonic C. elegans cells cultured in vitro using this method, appear to differentiate and recapitulate the expression of genes in a cell specific manner. Techniques that require direct access to the cells or isolation of specific cell types from the other tissues can be applied on C. elegans cultured cells.

Метод для культивирования эмбриональных<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Клетки

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

To stain C. elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be bypassed by chemical or mechanical methods. "Freeze-cracking" is one method used to physically pull the cuticle from nematodes by compressing nematodes between two adherent slides, freezing them, and pulling the slides apart. Freeze-cracking provides a simple and rapid way to gain access to the tissues without chemical treatment and can be used with a variety of fixatives. However, it leads to the loss of many of the specimens and the required compression mechanically distorts the sample. Practice is required to maximize recovery of samples with good morphology. Freeze-cracking can be optimized for specific fixation conditions, recovery of samples, or low non-specific staining, but not for all parameters at once. For antibodies that require very hard fixation conditions and tolerate the chemical treatments needed to chemically permeabilize the cuticle, treatment of intact nematodes in solution may be preferred. If the antibody requires a lighter fix or if the optimum fixation conditions are unknown, freeze-cracking provides a very useful way to rapidly assay the antibody and can yield specific subcellular and cellular localization information for the antigen of interest.

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

"Freeze-cracking," a method for exposing the inner tissues of the nematode C. elegans to antibodies for protein localization, is demonstrated.

Антитела Окрашивание в<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Использование &quot;Freeze-Крекинг&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound responses and repair in this model have illuminated our understanding of the cytoskeletal and genomic responses to tissue damage. The two most commonly used methods to wound the C. elegans adult skin are pricks with microinjection needles, and local laser irradiation. Needle wounding locally disrupts the cuticle, epidermis, and associated extracellular matrix, and may also damage internal tissues. Laser irradiation results in more localized damage. Wounding triggers a succession of readily assayed responses including elevated epidermal Ca2+ (seconds-minutes), formation and closure of an actin-containing ring at the wound site (1-2 hr), elevated transcription of antimicrobial peptide genes (2-24 hr), and scar formation. Essentially all wild type adult animals survive wounding, whereas mutants defective in wound repair or other responses show decreased survival. Detailed protocols for needle and laser wounding, and assays for quantitation and visualization of wound responses and repair processes (Ca dynamics, actin dynamics, antimicrobial peptide induction, and survival) are presented.

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The adult C. elegans skin is a tractable model for studies of epithelial wound responses, including wound closure, scar formation, and innate immunity.

Методы для кожи телесные повреждения и анализы для заживления ответы в<em&gt; C. Элеганс</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Methods to Assess Subcellular Compartments of Muscle in C. elegans

Muscle is a dynamic tissue that responds to changes in nutrition, exercise, and disease state. The loss of muscle mass and function with disease and age are significant public health burdens. We currently understand little about the genetic regulation of muscle health with disease or age. The nematode C. elegans is an established model for understanding the genomic regulation of biological processes of interest. This worm&#8217;s body wall muscles display a large degree of homology with the muscles of higher metazoan species. Since C. elegans is a transparent organism, the localization of GFP to mitochondria and sarcomeres allows visualization of these structures in vivo. Similarly, feeding animals cationic dyes, which accumulate based on the existence of a mitochondrial membrane potential, allows the assessment of mitochondrial function in vivo. These methods, as well as assessment of muscle protein homeostasis, are combined with assessment of whole animal muscle function, in the form of movement assays, to allow correlation of sub-cellular defects with functional measures of muscle performance. Thus, C. elegans provides a powerful platform with which to assess the impact of mutations, gene knockdown, and/or chemical compounds upon muscle structure and function. Lastly, as GFP, cationic dyes, and movement assays are assessed non-invasively, prospective studies of muscle structure and function can be conducted across the whole life course and this at present cannot be easily investigated in vivo in any other organism.

Methods to Assess Subcellular Compartments of Muscle in C. elegans

Skeletal muscle is essential for locomotion and is the bodies&#8217; main protein store. Muscle health measurements within C. elegans are described. Prospective changes to muscle structure and function are assessed using localized GFP and cationic dyes.

Методы оценки субклеточных отсеков Muscle в<em&gt; С. Элеганс</em

Muscle is a dynamic tissue that responds to changes in nutrition, exercise, and disease state. The loss of muscle mass and function with disease and age ...

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for the conversion and replication of their benign cellular isoform. Accumulating evidence suggests that many protein aggregates can act as self-propagating templates and corrupt the folding of cognate proteins. Although aggregates can be functional under certain circumstances, this process often leads to the disruption of the cellular protein homeostasis (proteostasis), eventually leading to devastating diseases such as Alzheimer&#8217;s disease (AD), Parkinson&#8217;s disease (PD), Amyotrophic lateral sclerosis (ALS), or transmissible spongiform encephalopathies (TSEs). The exact mechanisms of prion propagation and cell-to-cell spreading of protein aggregates are still subjects of intense investigation. To further this knowledge, recently a new metazoan model in Caenorhabditis elegans, for expression of the prion domain of the cytosolic yeast prion protein Sup35 has been established. This prion model offers several advantages, as it allows direct monitoring of the fluorescently tagged prion domain in living animals and ease of genetic approaches. Described here are methods to study prion-like behavior of protein aggregates and to identify modifiers of prion-induced toxicity using C. elegans.

Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans

Prion-like propagation of protein aggregates has recently emerged as being implicated in many neurodegenerative diseases. The goal of this protocol is to describe, how to use the nematode C. elegans as a model system to monitor protein spreading and to investigate prion-like phenomena.

Исследуя распространение и токсичности прионами как белков с использованием многоклеточных животных модельного организма<em&gt; C. Элеганс</em

Prions are unconventional self-propagating proteinaceous particles, devoid of any coding nucleic acid. These proteinaceous seeds serve as templates for ...

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Quantitatively capturing developmental processes is crucial to derive mechanistic models and key to identify and describe mutant phenotypes. Here protocols are presented for preparing embryos and adult C. elegans animals for short- and long-term time-lapse microscopy and methods for tracking and quantification of developmental processes. The methods presented are all based on C. elegans strains available from the Caenorhabditis Genetics Center and on open-source software that can be easily implemented in any laboratory independently of the microscopy system used. A reconstruction of a 3D cell-shape model using the modelling software IMOD, manual tracking of fluorescently-labeled subcellular structures using the multi-purpose image analysis program Endrov, and an analysis of cortical contractile flow using PIVlab (Time-Resolved Digital Particle Image Velocimetry Tool for MATLAB) are shown. It is discussed how these methods can also be deployed to quantitatively capture other developmental processes in different models, e.g., cell tracking and lineage tracing, tracking of vesicle flow.

Tracking and Quantifying Developmental Processes in C. elegans Using Open-source Tools

Here it is shown how to track and quantify developmental processes in C. elegans. The methods presented are based on open-source tools that can be easily implemented. It is demonstrated how to reconstruct 3D cell-shape models, how to manually track subcellular structures, and how to analyze cortical contractile flow.

Отслеживание и Количественная процессов развития в<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Использование инструментов с открытым кодом

Quantitatively capturing developmental processes is crucial to derive mechanistic models and key to identify and describe mutant phenotypes. Here ...

Measurements of Physiological Stress Responses in C. Elegans

Organisms are often exposed to fluctuating environments and changes in intracellular homeostasis, which can have detrimental effects on their proteome and physiology. Thus, organisms have evolved targeted and specific stress responses dedicated to repair damage and maintain homeostasis. These mechanisms include the unfolded protein response of the endoplasmic reticulum (UPRER), the unfolded protein response of the mitochondria (UPRMT), the heat shock response (HSR), and the oxidative stress response (OxSR). The protocols presented here describe methods to detect and characterize the activation of these pathways and their physiological consequences in the nematode, C. elegans. First, the use of pathway-specific fluorescent transcriptional reporters is described for rapid cellular characterization, drug screening, or large-scale genetic screening (e.g., RNAi or mutant libraries). In addition, complementary, robust physiological assays are described, which can be used to directly assess sensitivity of animals to specific stressors, serving as functional validation of the transcriptional reporters. Together, these methods allow for rapid characterization of the cellular and physiological effects of internal and external proteotoxic perturbations.

Measurements of Physiological Stress Responses in C. Elegans

Here, we characterize cellular proteotoxic stress responses in the nematode C. elegans by measuring the activation of fluorescent transcriptional reporters and assaying sensitivity to physiological stress.

Измерения физиологических стрессовых реакций у C. Elegans

Organisms are often exposed to fluctuating environments and changes in intracellular homeostasis, which can have detrimental effects on their proteome and ...