Постоянное давление в устройстве фиксации поддерживает легкие в достаточно завышенном состоянии генерации гистологического образца легких подходит для оценки мягкого сигаретного дыма индуцированной эмфиземы. Основным преимуществом этой модели является то, что она может исправить многие легкие в то же время, используя то же постоянное давление без коллапса легких или дефляции. Демонстрация процедуры будет Наоко Арано аспирант из моей лаборатории.
После подтверждения отсутствия реакции на рефлекторное движение сделайте разрез в коже и мышечной ткани вдоль медиальной линии мыши, направленной на цефалическую область, и вырежьте боково, чтобы создать более широкое рабочее пространство. После разоблачения диафрагмального слоя прокалывают ткань мипсами и открывают грудное пространство. Отрежьте стернаную область, позволяющую визуализировать легкие и сердце.
И вырезать левый атриум и правый желудочек. Вставьте канюлю 24 калибра, соединенную с перфузионной насосом, в правый желудочек и навелите канюлю на головную область, пока не достигнет легочной артерии. Затем включите насос и пронизать ткани с примерно 200 миллилитров PBS в течение одного часа, пока все ткани легких изменилась на белый цвет.
В конце перфузии вырезать соединительной ткани, окружающие трахеи, легких и сердца, и использовать шов, чтобы связать право основных бронхов. Затем собери все отдельные доли правого легкого и поместите сердце и доли левого легкого в отдельные 10 миллилитровых шприцев, содержащих соответствующую фиксацию. Увягать поршень создания вакуума в шприце, чтобы надуть легкие и удалить легкое из шприца.
Вставьте 20 калибровочных канюле в трахею и используйте шов для обеспечения канюлы на месте. Подключите один миллилитровый шприц, наполненный фиксатором, к канюле и заполните легкое дополнительным фиксатором для проверки на наличие утечек. Убедитесь, что место вставки было обеспечено, чтобы предотвратить отсоединение образца легких от легочной доски во время фиксации.
Затем перенесите ткань на оборудование давления фиксации легких, удалив образец и связав трахею узлом в конце периода фиксации. Нижний компонент оборудования давления фиксации легких, в которое вставляется образец легких, соединен через 20 калибровочных канюли с кончиком потока формалина с трехвалютным стопкоком. Давление генерируется из различных уровней поверхности фиксатора между нижним и верхним отсеками.
Разница в давлении составляет 25 сантиметров воды, но ручка регулировки высоты может быть использована для регулировки давления до 25-30 сантиметров воды. Насос соединяет нижние и верхние контейнеры, сохраняя 25-сантиметровую разницу в фиксаторной высоте поверхности, и направляет поток агента. После 48 часов фиксации легкие мышей SMP30, подвергшихся воздействию окружающего воздуха, не демонстрируют заметного расширения воздушного пространства.
Значительное расширение воздушного пространства и разрушение альвеолярной стены, однако, наблюдаются у мышей SMP30, подвергшихся воздействию хронического сигаретного дыма. Кроме того, средний линейный перехват и разрушительный индекс легких образцов значительно больше в дыме подвергаются SMP30 нокаут мышей, чем в воздухе подвергаются животных. Наша лаборатория использует 10%формалин, но исследователи могут использовать другие агенты фиксации в соответствии с их экспериментальными потребностями.
Как мы уже сообщали с помощью продемонстрированой системы фиксации легких образцы могут быть собраны из различных моделей эмфиземы мыши для их морфометрической оценки. Как фиксируя вещества могут быть опасны всегда носить соответствующее защитное оборудование персонала и работать в хорошо проветриваемой комнате.
