Нейродегенеративные заболевания часто проявляется с разрушительными симптомами поведения, такими как когнитивные нарушения, дисфункции настроения, или даже двигательные дисфункции. Это исследование позволяет точно оценивать поведенческие фенотипы с высоким уровнем повторяемости. Мы разрабатываем комплексную батарею, которая может быть неоднократно использована в анализе поведения у мышей.
Этот тест ослов двигательных функций, социального взаимодействия, эмоциональной функции и когнитивных функций. Организовав заказ и интервал испытаний в этой батарее, мы увеличили эффективность тестирования и уменьшили помехи среди тестов и нагрузку на мышей от частой обработки. Для начала организуйте поведенческий тест в порядке, описаном в текстовом протоколе.
Выполните тест на открытом поле в непрозрачной, белой, пластиковой арене. Запустите запись камеры и аккуратно положите мышь рядом с серединой стены арены, обращенной к стене. Завехай поведение мыши на 10 минут и верните ее в домашнюю клетку.
Затем разделите арену на четыре на четыре квадрата на экране компьютера. Подсчитайте количество раз, когда мышь пересекает линии сетки на арене для оценки функции локомотива. Чтобы оценить беспокойство, измерить количество времени, которое мышь проводит в центральной области арены.
Провести повышенный плюс лабиринт тест в тот же день. Как только все мыши закончат испытание открытого поля, поместите мышь на стыке открытых и закрытых рук. Завещай поведение мыши в течение пяти минут, прежде чем вернуть мышь в домашнюю клетку.
После двух дней открытых полевых испытаний навеять новый тест распознавания объектов в соответствии с текстовым протоколом. Запустите камеру и поместите мышь на арену, обращенную к середине стены, чтобы ознакомиться с мышью. Завехать поведение мыши в течение 10 минут.
Затем верните мышь в свою домашнюю клетку. Через 24 часа после ознакомляться, повторите тест с одним новым объектом. Измерьте время взаимодействия мыши с новым объектом и знакомым объектом отдельно.
Затем вычислите память мыши как предпочтение объекту романа. Для проверки социального взаимодействия используйте открытую полную арену с двумя прозрачными камерами с отверстиями на поверхности. Поместите тему мыши на арену в течение трех минут периода исследования объектов, чтобы приувимить мышь к камерам.
Затем верните предметную мышь в свою домашнюю клетку и очистите арену. Положите новую мышь в одну из камер. Затем вновь ввести тему мыши на арену и записать в течение трех минут.
При просмотре видео, оценить социальное взаимодействие путем измерения соотношения времени тема мыши тратит взаимодействующих с новой камерой мыши или пустой камеры. Далее выполните ускоряющийся тест ротарода. В каждом испытании поместите мышь на статический стержень, обращенный к стене напротив машины.
Привычка мышей к ротароду, обучтая его в течение трех дней в наивных мышей до появления возможных симптомов, так что мышь в равной степени узнает масштаб. Остановите устройство, когда мышь упадет, и завещаете время, проведенное мышью на стержне. Повторите этот процесс еще два раза, прежде чем вернуть мышь в свою домашнюю клетку.
Далее положите водный лабиринт в центр поведенческой комнаты, и отметь положение лабиринта, чтобы обеспечить положение водного лабиринта остается постоянным. Разделите лабиринт на четыре воображаемых квадранта. Повесьте визуальные сигналы в центре каждого квадранта.
Затем поместите платформу в центр четвертого квадранта и отметь ее расположение. Заполните лабиринт водой, окрашенной в белый цвет с сухого молока, пока уровень воды на один сантиметр выше, чем платформа. В начале каждого учебного испытания, начать видеозапись, и осторожно положить мышь в лабиринте.
Держись подальше от мыши. Верните мышь в домашнюю клетку, когда мышь не сможет найти платформу в течение 60 секунд или если мышь находит платформу в течение 60 секунд и остается на ней в течение 10 секунд. После окончания теста остановите видео и положите мышь в домашнюю клетку под инфракрасный свет.
Наконец выполнить фазу зонда испытания лабиринта воды, как описано ранее, без платформы. Затем подготовь цилиндрический танк к принудительной проверке плавания. Запустите видеозапись и аккуратно положите мышь в воду в центре бака.
Запись мыши в течение шести минут, прежде чем положить мышь обратно в свою домашнюю клетку. Просмотрите видео принудительного теста на плавание. Измерьте время неподвижности в последние пять минут видео.
Этот протокол должен был изучить поведенческие изменения у мышей после респираторного воздействия наночастиц кремнезема. Результаты испытаний на открытом поле и ускоренного теста ротарода показали, что наночастицы кремнезема не влияют на локомотив или двигательную функцию у мышей. Социальное взаимодействие деятельности было затронуто после одного месяца воздействия кремнезема наночастиц, однако открытое поле тест, повышенный плюс лабиринт тест, и принудительного плавать тест не указал каких-либо тревоги или депрессии после одного месяца воздействия.
Двухмесячное воздействие наночастиц кремнезема действительно приводит к тревоге, о чем свидетельствуют результаты повышенного плюс лабиринт теста. Когнитивные нарушения были также обнаружены в водном лабиринте тест после двух месяцев воздействия. Эта батарея предназначена для комплексного анализа поведения в нейродегенерации в штамме мыши C57.
Он наиболее подходит для нейродегенерации связанных продольных исследований в токсичности нейротоксина или потенциальных факторов риска, или разработки лекарств, которые часто имеет долгосрочное введения и повторного тестирования.
