Эта модель интерфейса крови и мозга человека полезна для изучения переноса молекул в нейро систему. А также для изучения микробов достигают инфицированной опухоли головного мозга. Добавление мини-мозга к этому гемовому мозгу или BBB модели позволяет изучать наши патогены и молекулы, которые вызывают BBB ведут себя в головном мозге.
Demostrating процедуры будет Флориан Бакао, аспирантов для моей лаборатории. Чтобы создать BBB мини-мозг полиэстер мембраны культуры вставки устройства, разбавить клетки в пять раз 10 до четвертой клетки на вставить концентрации неполной эндотелиальной клеточной среды и добавить соответствующий объем клеток для каждого полиэстер мембраны культуры вставить в 12 хорошо пластины. Затем поместите вставки и инкубатор культуры клеток до тех пор, пока клетки не достигнут 100%-го слияния.
Держите 12 хорошо пластины с одним миллилитр поли-D-лизин ее хорошо в течение четырех часов при комнатной температуре. Затем один миллилитр ламинина на колодец за ночь. Замените ламинин одним миллилитром эндотелиальной клеточной среды, дополненной сывороткой из крупного рогатого скота 5%, или FBS.
Поместите место в инкубатор на один час. Для приготовления мини-зерна аккуратно попробуйте опробовать астроциты человеческих нейронов в клоне CHME пяти клеток. Свяжут клеточные гранулы с полной эндотелиальной клеточной средой.
После подсчета в 3,6 раза от 10 до пятого нейронов и астроцитов в 0,4 раза от 10 до пятого клона CHME пять клеток на хорошо имеют 12 пластины хорошо. И семя 12 хорошо пластины. Чтобы построить BBB мини-мозг через 24 часа после посева заменить используемую среду со свежей полной эндотелиальной клеточной среды и передачи мозговой микро-сосудистой эндотелиальной клетки покрытием полиэфирной мембраны культуры вставки над мини-клеток мозга.
Затем поместите устройство BBB много мозга в инкубатор. Для проверки BBB мини мозга эндотелиальной проницаемости добавить 1,5 миллилитров транспортного буфера на колодец к новой пластине 12 хорошо. И переверните каждый фильтр вверх дном, чтобы тщательно удалить среду, не влияя на эндотелиальный клеточный барьер.
Поместите каждый фильтр в один колодец заполненной транспортной буферной пластины и добавьте в каждую колодец 0,5 миллилитров люцифера желтого цвета. Затем поместите пластину в инкубатор в течение 10 минут, прежде чем передать фильтры в новый транспортный буфер заполнены 12 пластины хорошо. После настройки BBB многие устройства мозга, как попродемонстрировано, добавить 3500 платформер единиц французского нейротрофического штамма вируса желтой лихорадки разбавленной и 50 микролитров 2%FPS эндотелиальной клеточной среды, очень тщательно, на вершине luminal отсека.
Прививать контроль BBB мини-мозг с 50 микролитров 2%FBS эндотелиальной клеточной среды без вируса. Затем поместите вирус подвергать BBB многие устройства мозга в инкубаторе в течение 24 часов. На следующий день удалите вставки, чтобы определить проницаемость эндотелиальной клетки и компаньона, а также так же, как это было продемонстрировано.
Сохранить один миллилитр образца из каждой хорошо, чтобы определить вирус titer в среднем отсеке. Под вставкой аккуратно, чтобы избежать утечки светимого отсека в аблюминальные отсеки. Для изучения транспортировки нейрона, нацеленного на биомолекуляр через геммоэнкефалический барьер, добавьте биомолекуляр, представляющий интерес для вставок, и верните пластину в инкубатор клеточной культуры.
Через 24 часа удаленно вставляется и определяется эндотелиальная проницаемость. Затем испачкать многие клетки мозга с соответствующим антителом для обнаружения присутствия био молекулы интереса в мини-мозг. Человеческие церебральные микрокосмочные эндотелиальные клетки выражают все подмножества рецепторов, транспортеров Efflux или транспортеров, которые являются ключевыми релевантными белками для их биологических функций.
Некоторые французские нейротропные штамм вируса желтой лихорадки может пересечь геммоградный барьер в 24 часов. Затем вирусы усиливаются в течение следующих двух дней путем умножения вируса внутри клеток мозга. Кроме того, экспрессия специфических вирусных биомаркеров стимулируется, когда эта нейроинвазивная вирусная популяция последовательно проносится на мини-клетки мозга и строго коррелирует с вирусной нагрузкой.
После добавления к пределу отсека клеток проникающая молекула Neuro-Tag Neurovita пересекает геммоуфический барьер и способна нацелиться на человеческие нейроны. Клеточная проникающая молекула нейро тега Delta neurovita пересекает эндотелиальный клеточный барьер, но нацелена менее эффективно на человеческие нейроны. После добавления в небольшой средний отсек, клеточная проникающая молекула Neuro-Tag Neurovita пересекает геммоугический барьер и способна регенерировать аксоны человеческих нейронов, после ранения.
В отличие от клеточной проникающей молекулы Neuro-Tag Neurovita Delta, неактивная форма Нейровита. При применении после аксон царапин клетки проникающей молекулы Neuro-Tag Neurovita вызывает нейрозащиту раненых нейронов и х зональной регенерации. Строго ради практики.
не более использовать I-клетки проходы. Постарайтесь сохранить некоторое подобие среды и регионов и проверить на отсутствие микоплазмы. Взаимодействия между мини-мозгом и препаратами являются микробами, представляющими интерес, могут быть дополнительно изучены с помощью стенограммы, которая химически оцифровывазирует эту или классическую биологию, называемую методами.
