Небольшое количество васкуляризированных композитных алотрансплантов, выполняемых клинически, требует надежной, воспроизводимой модели животных для изучения основных причин отторжения трансплантата. Клинически значимые ткани, такие как кожа, мышцы и кости, присутствуют в модели. Кроме того, нефункциональный характер нашей модели позволяет быстрее операции, меньше ишемического времени для лоскута, и более низкая заболеваемость по сравнению с ортопедическими моделями VCA.
У реципиентов пересадки рук васкулопатия донорских сосудов может привести к полному закрытию сосудов и ишемическому повреждению привитой руки. Эта модель является инструментом для изучения развития этих васкулопатических событий. Перед попыткой этой хирургической модели, первичный хирург должен быть знаком с и владеть макрососудистых хирургических методов.
Это сложная и долгая процедура. Визуальная демонстрация поможет другим лабораториям подготовиться соответствующим образом и понять шаги операции. Для начала, сначала урожай задней конечности донора крысы, сделав разрез кожи в паховой вогнутости, подвергая бедренной сосудов.
Сделайте разрез брюшной кожи, который поможет в вскрытии педикюра. После дисаротикуляции колена и лодыжки, сделать спинной порезы кожи, трансект pedicle, чтобы освободить трансплантат, и транспортировать трансплантат немедленно получателя хирургического стола, где хирургическое место получателя животное готовится заранее, чтобы свести к минимуму ишемическое время трансплантата. На животное-реципиент, разоблачить и вскрыть бедренные сосуды, как и раньше, а затем анатомозы трансплантата, вены из конца в сторону, артерии из конца в конец.
Вставка трансплантата в паховой карман и сориентировать его вверх дном. Наконец, шов кожи. Чтобы начать процедуру, побрить анестезированной донорской крысы, а затем использовать крем для депиляции.
Ввись 30 единиц гепарина подкожно в области потертости. Поместите животное на грелку и создать стерильное хирургическое поле путем подготовки, очистки и драпировки хирургической области, в том числе спинной аспект ноги. Используйте скальпель лезвие номер 15, чтобы сделать 3-сантиметровый разрез кожи в паховой вогнутости донорской крысы.
Используйте ножницы Iris, чтобы боково отразить паховую жировую прокладку. Используя тупое вскрытие ватным тампоном, разоблачить общие бедренные сосуды, а затем поместить проволочный крюк с резинкой, чтобы втянуть мышцы живота. Под рассечением микроскопа с увеличением до 40X, используйте микро-ножницы, номер три прямых миппов ювелира, и номер пять 45-градусный угловой типс, чтобы вскрыть pedicle проксимально от появления общих бедренной кости под паховой связки, и distally к слиянию popliteal сосудов в трансплантат.
Использование микро-клипов и биполярных ювелиров миппы, ligate и разделить большие артериальные и венозные ветви для мобилизации основных бедренной сосудов. Используйте тонкие биполярные типсы для прижигания любых небольших ветвей. Используйте ножницы Iris, чтобы сделать разрез кожи из центра предыдущей кожи, вырезанной вдоль брюшной стороны задней части спинки до области лодыжки.
Вырезать gracilis мышцы и другие мышцы аддуктора под ним в вертикальном порядке, чтобы разоблачить и ligate медиальных проксимальных геникулярных сосудов, глубоко ветвясь мелких сосудов, и седалищного нерва. На данный момент, на отдельном хирургическом столе, другой хирург должен intubate и анестезии получателя животных подготовить получателя хирургического сайта во времени для трансплантации размещения, и свести к минимуму ишемическое время трансплантата. Сделайте обходные разрезы кожи на уровне колена и лодыжки, отмять колено и лодыжку, а также удалить посторонние мышцы и ткани.
Сделайте вертикальный разрез кожи на спинной стороне задней части, чтобы освободить трансплантат, состоящий из малоберцовой кости и голени, и теперь соединен только педикюр. Поместите небольшие зажимы как проксимально, насколько это возможно на бедренной артерии и вены и сократить pedicle как можно ближе к паховой связки. Используйте 27-го калибра промывки тупой канюли для введения гепаринизированного солевого раствора в бедренной артерии, чтобы промыть трансплантат крови.
Оберните изолированный трансплантат в теплую пропитанную солевым раствором марлю и немедленно транспортите ее к столу с животным-реципиентом, при этом хирургическое отделение уже подготовлено к сосудистому анатомозу. Intubate получателя крысы, и глубоко анестезировать с 2,5 до 3%испаряется изофлюран, сбалансированный с одним литром в минуту кислорода. Поместите животное на грелку, а также скраб и драпировка хирургического сайта.
В то время как первый хирург работает над освобождением трансплантата от животного-донора, используйте скальпель лезвие номер 15, чтобы сделать трехсемейный разрез кожи в паху вогнутость анестезировал крысы-реципиента. Используйте ножницы Iris, чтобы боково отразить паховую жировую прокладку. После разоблачения общих бедренной сосудов таким же образом, как с донором животных, поместите проволочный крюк с резинкой, чтобы втянуть мышцы живота.
Затем ligate и разделить Мерфи филиалов. Используя 10-0 нейлоновых прерванных швов, анатомозы донорских сосудов. Для реципиента судов с помощью венозной техники из стороны в сторону.
Затем выполните артериальный астомоз с помощью эндо-энд-техники. После постепенного высвобождения зажимов, контролировать анастомотические участки для кровотечения и добавить дополнительные швы, если это необходимо. Для того, чтобы обеспечить эффективную реперфузию трансплантата, визуально оцените сосудистый анатомоз.
Затем вставка трансплантата в паховой карман, и сориентировать его вверх ногами, с голеностопного сустава начальника, и коленного сустава уступает. Используйте заправляя швы для того чтобы обеспечить трансплантат к смежным мышцам. Наконец, закройте кожу через прерванный горизонтальный матрас кожи поглощаемых 4-0 швов, и продолжать послеоперационный уход, как описано в рукописи.
Крыса VCA гетеротопных хиндлимб остеомиокутановых лоскут модель позволяет для долгосрочного выживания алотрансплантата при иммуносупрессии. Заслонка хорошо спрятана в паховой области и представляет собой минимальную заболеваемость и дискомфорт для животного. Когда иммуносупрессионной терапии была остановлена, трансплантат был отклонен.
Доплеровые изображения алотрансплантата показывают переход от минимального изобилия крови сразу после VCA, к полной реваскуляризации лоскута на 64-й день. Биопсия кожи сингенеического алотрансплантата на 45-й день показывает нормальную морфологию компонентов кожи, в то время как происходит атрофия и моноядерная инфильтрация клеток в аллогенном алоттате при отторжении на 75-й день, ежедневно обработаемой более низкой дозой иммунодепрессанта. Мышечная биопсия сингенеического алотрансплантата на 45-й день показывает нормальную морфологию, в то время как мышечная атрофия и моноядерная инфильтрация клеток проявляется в аллогенном алоттате при отторжении на 98-й день, ежедневно лечатся более низкой дозой иммунодепрессанта.
Биопсия бедренной артерии сингенеического алоттата на 45-й день показывает нормальную морфологию артерии, в отличие от бедренной артерии аллогенного алоттата при отторжении на 98-й день, ежедневно лечится более низкой дозой иммунодепрессанта. Эта модель предоставляет инструмент для проверки воздействия острого отторжения, хронического отторжения и экологических факторов, таких как инфекция и хирургические оскорбления на развитие васкулопатии. Иммуносупрессивные препараты необходимы для длительного выживания трансплантата.
Эти препараты являются химически опасными, и должны рассматриваться с осторожностью и надлежащего персонала защитного оборудования.
