Le petit nombre d’allotransplants composites vascularisés exécutés médicalement nécessite un modèle animal fiable et reproductible afin d’étudier les causes sous-jacentes du rejet de greffe. Les tissus cliniquement pertinents tels que la peau, le muscle et l’os sont tous présents dans le modèle. En outre, la nature non fonctionnelle de notre modèle permettent une chirurgie plus rapide, moins de temps ischémique pour le rabat, et une morbidité plus faible par rapport aux modèles orthotopiques de VCA.
Chez les receveurs de greffes à la main, la vasculopathie des vaisseaux donneurs peut entraîner une fermeture complète des vaisseaux et des dommages ischémiques à la main greffée. Ce modèle est un outil pour étudier le développement de ces événements vasculopathiques. Avant de tenter ce modèle chirurgical, le chirurgien primaire devrait être familier avec et compétent dans les techniques chirurgicales macrovasculaires.
C’est une procédure compliquée et longue. La démonstration visuelle aidera d’autres laboratoires à se préparer en conséquence et à comprendre les étapes de la chirurgie. Pour commencer, récoltez d’abord le membre postérieur d’un rat donneur en faisant une incision cutanée dans la concavité de l’aine, exposant les vaisseaux fémoraux.
Faire une incision ventrale de la peau, qui aidera à la dissection du pédule. Après la désarticulation du genou et de la cheville, faire des coupures cutanées dorsales, transecter le pédicule pour libérer la greffe, et transporter la greffe immédiatement à la table chirurgicale du receveur, où le site chirurgical de l’animal receveur est préparé à l’avance pour minimiser le temps ischémique de la greffe. Sur l’animal receveur, exposer et disséquer les vaisseaux fémoraux comme avant, puis anastomoser la greffe, veine de bout en côté, artère de bout en bout.
Incruster la greffe dans la poche inguinale et l’orienter à l’envers. Enfin, suture de la peau. Pour commencer la procédure, raser un rat donneur anesthésié, puis utiliser de la crème depilatory.
Injecter 30 unités d’héparine sous-cutanée dans la zone de scruff. Placez l’animal supine sur un coussin chauffant et produisez un champ chirurgical stérile en prédant, en frottant et en drapant la zone chirurgicale, y compris l’aspect dorsal de la jambe. Utilisez la lame de scalpel numéro 15 pour faire une incision cutanée de 3 centimètres dans la concavité de l’aine du rat donneur.
Utilisez des ciseaux Iris pour refléter latéralement la garniture de graisse inguinale. À l’aide d’une dissection contondant à l’aide d’un coton-tige, exposer les vaisseaux fémoraux communs, puis placer un crochet métallique avec une bande élastique pour rétracter les muscles abdominaux. Sous un microscope dissecting avec jusqu’à 40X grossissement, utilisez des micro-ciseaux, numéro trois forceps bijoutier droit, et le numéro cinq forceps à angle de 45 degrés pour disséquer le pédule proximalement de l’émergence des vaisseaux fémoraux communs sous le ligament inguinal, et distally à la confluence des vaisseaux popliteal dans la greffe.
À l’aide de micro-clips et de bijoux bipolaires forceps, ligate et diviser les grandes branches artérielles et veineux pour mobiliser les principaux vaisseaux fémoraux. Utilisez de fines forceps bipolaires pour cautériser les petites branches. Utilisez des ciseaux Iris pour faire une incision cutanée à partir du centre de la peau précédente coupée le long du côté ventral de l’arrière-plan à la cheville.
Coupez le muscle gracilis et les autres muscles adducteurs en dessous d’une manière verticale pour exposer et ligate les vaisseaux géniculaires proximaux médiaux, les petits vaisseaux à branches profondes et le nerf sciatique. À ce stade, sur une table chirurgicale séparée, l’autre chirurgien devrait intuber et anesthésier l’animal destinataire pour préparer le site chirurgical de destinataire à temps pour le placement de greffe, et pour réduire au minimum le temps ischémique de la greffe. Faire des incisions cutanées circonférentielles au niveau du genou et de la cheville, désarticuler le genou et la cheville, et enlever les muscles et les tissus étrangers.
Faire une incision verticale de la peau sur le côté dorsal de l’arrière-bord pour libérer la greffe, composée de péroné et tibia, et maintenant connecté uniquement par le pédule. Placez les petites pinces le plus près possible de l’artère et de la veine fémorales et coupez le pédule le plus près possible du ligament inguinal. Utilisez une canule émoussée à chasse d’eau de calibre 27 pour injecter de la solution saline héparinisée dans l’artère fémorale pour rincer la greffe de sang.
Enveloppez la greffe isolée dans de la gaze chaude trempée saline et transportez-la immédiatement à la table avec l’animal receveur, le site chirurgical ayant déjà été préparé pour l’anastomose vasculaire. Intuber le rat receveur, et anesthésier profondément avec 2,5 à 3% d’isoflurane vaporisé, équilibré avec un litre par minute d’oxygène. Placez l’animal supine sur un coussin chauffant, frottez et drapez le site chirurgical.
Pendant que le premier chirurgien travaille à libérer la greffe de l’animal donneur, utilisez la lame du scalpel numéro 15 pour faire une incision cutanée de trois centimètres dans la concavité de l’aine du rat receveur anesthésié. Utilisez des ciseaux Iris pour refléter latéralement la garniture de graisse inguinale. Après avoir exposé les vaisseaux fémoraux communs de la même manière qu’avec l’animal donneur, placez un crochet métallique avec une bande élastique pour rétracter les muscles abdominaux.
Puis ligate et diviser les branches murphy. À l’aide de sutures interrompues en nylon 10-0, les vaisseaux donneurs d’anastomose. Aux vaisseaux destinataires par la technique veineuse de bout en côté.
Ensuite, effectuez l’anastomose artérielle par la technique de bout en bout. Après avoir progressivement libéré les pinces, surveiller les sites anastomotic pour le saignement et ajouter des sutures supplémentaires si nécessaire. Afin d’assurer une reperfusion efficace de greffe, évaluez visuellement l’anastomosis vasculaire.
Puis incruster la greffe dans la poche inguinale, et l’orienter à l’envers, avec l’articulation de la cheville supérieure, et l’articulation du genou inférieur. Utilisez des sutures de tucking pour fixer la greffe aux muscles adjacents. Enfin, fermez la peau par des sutures horizontales interrompues absorbables par la peau de matelas 4-0, et continuez avec des soins postopératoires tels que décrits dans le manuscrit.
Le modèle hétérotopique d’aileron ostéomyocutaneous d’arrière-point de rat VCA permet la survie à long terme d’allograft sous l’immunosuppression. Le rabat est bien caché dans la région de l’aine, et constitue une morbidité minimale et un inconfort pour l’animal. Quand le traitement d’immunosuppression a été arrêté, la greffe a été rejetée.
Les images de Doppler de l’allograft montrent un décalage de profusion minimale de sang immédiatement post-VCA, à la revascularisation complète du aileron le jour 64. La biopsie de peau d’une allogreffe syngénéique le jour 45 montre la morphologie normale des composants de peau, alors qu’il y a a atrophie et infiltration mononucléaire de cellules dans une allogreffe allogénique dans le rejet le jour 75 traité quotidiennement avec une dose inférieure d’un immunosuppresseur. La biopsie musculaire d’une allogreffe syngénéique le jour 45 montre la morphologie normale, tandis que l’atrophie de muscle et l’infiltration mononucléaire de cellules sont apparentes dans une allogreffe allogénique dans le rejet le jour 98, traitée quotidiennement avec une dose inférieure d’un immunosuppresseur.
La biopsie fémorale d’artère d’un allograft syngénéique le jour 45 montre la morphologie normale de l’artère, en contraste à l’artère fémorale d’une allogreffe allogénique dans le rejet le jour 98, traitée quotidiennement avec une dose inférieure d’un immunosuppresseur. Ce modèle fournit un outil pour tester les effets du rejet aigu, du rejet chronique, et des facteurs environnementaux tels que l’infection et les insultes chirurgicales sur le développement de la vasculopathie. Des médicaments immunosuppresseurs sont nécessaires pour la survie à long terme de la greffe.
Ces médicaments sont dangereuses sur le plan chimique et doivent être manipulés avec prudence et avec l’équipement de protection du personnel approprié.
