Представлена достоверная и воспроизводимая хирургическая модель гетеротопной трансплантации задних конечности у крыс. Этот метод идеально подходит для краткосрочных исследований по сохранению или иммунному отторжению при VCA. Пошаговое описание позволит обучаемым быстро освоить операцию.
Для начала сделайте окружной разрез на коже над лодыжкой в дистальной трети ноги. Скелетонизируют и прижигают подкожную артерию и терминальную ветвь подколенной артерии с помощью биполярных щипцов. Прижигайте и режут икроножную мышцу, камбалу, переднюю большеберцовую кость и бицепс бедра до тех пор, пока большеберцовая кость не будет открыта.
Сделайте разрез на 2,5 сантиметра в правой паховой складке и рассекте паховую жировую подушку. Используйте втягивающееся втягивающее рыбий крючок, чтобы схватить паховую связку. Держите паховую жировую подушку дистально с помощью зажимных щипцов и втягивайте жировую подушку, чтобы обнажить бедренные сосуды.
Рассекте бедренные сосуды, индивидуализируйте ветви Мерфи и обжайте с помощью 8/0 нейлоновых завязок. Гепаринизировать крысу-донора путем введения гепарина в дорсальную вену полового литья с использованием иглы 27,5 калибра. Завершите разрез кожи вокруг бедра.
Используйте биполярные щипцы для прижигания бицепсов бедра и ягодичных поверхностных мышц, затем прижигайте и перерезайте седалищный нерв на средней длине бедренной кости. Обнажите бедренную комть проксимально на уровне заднего гребня бедренной кости и облизайте бедренные сосуды нейлоновыми завязками на уровне паховой связки. Выполните артериотомию на бедренной артерии чуть ниже лигатуры и расширьте, чтобы вставить ангиокатетер 24 калибра.
Прижигите и отрежьте оставшуюся мышцу под педикулой, чтобы обнажить переднюю сторону бедренной кости. Используйте костный резак, чтобы разрезать большеберцовую кость проксимально и разрезать бедренную кость как можно более дистально. Промыть частичную заднюю конечность двумя миллилитрами гепаринового физиологического раствора для получения четкого венозного оттока.
Поместите заднюю повязку на лед в стерильную марлю до микрососудистого переноса. Рассеките паховую жировую подушку и откитите паховую жировую подушку дистально, чтобы обнажить бедренные сосуды. Используйте крючок, чтобы втянуть паховую связку и зажимные щипцы, чтобы держать паховую жировую подушку дистально.
Рассекте бедренные сосуды, индивидуализируйте ветви Мерфи и обжайте нейлоновыми завязками, как показано на продемонстрированной. Обжигайте оба сосуда над эпигастральными сосудами с помощью нейлоновых стяжек. Поместите аппроксиматорные зажимы проксимально, расширьте хрусталик сосуда и промойте гепариновым физиологическим раствором.
Сделайте разрез на левом боку над бедром и создайте подкожный карман с подкожным туннелем к паховой складке. Поместите проксимальную часть частичной конечности и паховую жировую подушку через подкожный туннель для микрососудистого переноса. Выполняют венозные и артериальные анастомозы с помощью нейлоновых швов.
Снимите оба аппроксиматорных зажима и наблюдайте за реваскуляризацией конечности. Выполните тест на доение на обоих сосудах, чтобы оценить проходимость каждого анастомоза. Сделайте продольный разрез кожи на медиальную сторону пересаженная конечность и вставьте трансплантат.
Удалите лишнюю кожу трансплантата и закройте рану отдельными швами и бегущим швом с помощью рассасывающихся швов 4/0. Сшивайте паховые жировые подушечки пересаживаемой конечности и реципиента с помощью двух отдельных рассасывающихся швов и закрывайте паховую складку после последнего осмотра микрососудистого анастомоза. Эволюция гетеротопной модели задних конечности контролировалась до конца исследования.
Отрастание волос наблюдалось в течение первой послеоперационной недели, а кожное втягивание появилось через две недели. Васкуляризированная композитная недостаточность аллотрансплантации может возникнуть в течение первой послеоперационной недели из-за микрососудистого тромбоза. Венозный тромбоз был причиной ранней эвтаназии в 20% случаев, все из которых произошли до послеоперационного пятого дня.
Кожа казалась синей и становилась темнее с каждым днем. Членовредительство является серьезной проблемой при несенсации трансплантатов и часто происходит между послеоперационным днем, а также между двумя и седьмыми днями. Если это ограничено менее чем третью поверхности трансплантата и касается только кожи, хирургическое санация и шов с использованием нерассасывающихся швов могут быть обсуждены с штатным ветеринаром.
Профилактика членовредительства основывается на использовании электронного воротника, пришитого к шее до седьмого послеоперационного дня, и очистке любой крови или корки на хирургических ранах животного. Тяжелая аутофагия нескольких слоев трансплантата приводит к эвтаназии животного. Кожные кисты появились после 14 послеоперационного дня, иногда с кожным некротическим центром перед свищом.
Крайне важно убедиться, что размещение трансплантата не помешает животному быть амбулаторным, и что носка не изгибается или не тугается во время вставки трансплантата. Наша команда выполнила исследования по сохранению приобретенных конечностей перед трансплантацией. Были оценены эффекты различной продолжительности статического холодного хранения, а также различные протоколы перфузии конечностей.
