Индукция смерти мозга у мышей с использованием внутриартериального мониторинга кровяного давления и вентиляции через трахеостомию

Хотя донорство после смерти донорского мозга является основным источником для трансплантации твердых органов, необратимая потеря функции мозга вызывает патофизиологические изменения, которые приводят к системной воспалительной реакции. Эта муриновая модель индукции смерти мозга позволяет использовать большое разнообразие аналитических инструментов и нокаут-моделей для изучения путей регуляции смерти мозга. Для артериальной катетеризации после подтверждения отсутствия реакции на педаль рефлекс и удаления верхней брюшной волосы, дезинфицировать открытые кожи с 70% этанола и использовать рассечение ножницы, чтобы сделать разрез средней линии в коже.

Используя типсы, тупой вскрыть подменных желез и мышечной ткани шеи и отделить ткани подвергать общей сонной артерии. Место три 8-0 шелковые лигатуры под правой общей сонной артерии и место зажим на проксимальной лигатуры. Принесите напряжение в артерии так, чтобы поток был приостановлен и закрыть наиболее дистальной лигатуры.

Вставьте 26-калибровочный артериальный катетер через небольшое предварительное отверстие кожи на черепной стороне разреза. Сожмите катетер с щипцы, если люмен слишком велик, чтобы уменьшить задний поток и обеспечить катетер со всеми тремя швами, а затем использовать один 5-0 монофильтра nonabsorbable исправить катетер к коже вблизи заранее отверстие кожи. Для выполнения трахеостомии, используйте типсы, чтобы тупо вскрыть претрахеальной мускулатуры и место два 8-0 шелковые лигатуры под трахеей.

Вставьте вентиляционную трубку между двумя трахеевыми хрящами, чтобы избежать односторонней вентиляции и закрепив трубку обеими подготовленными лигатурами, затем закройте кожу 6-0 монофильтром неабсорбируемого ходового шва и проветрите мышь с частотой 150 в минуту и приливным объемом 200 микролитров. Чтобы вызвать смерть мозга у экспериментального животного, устроим мышь в положение склонного и, удерживая кожу типсами, используйте хирургические ножницы, чтобы удалить кожу из черепа. Просверлите одномиллиметровую скважину над левой теменной корой и используйте тупые типсы, чтобы проникнуть в конечный тканевой мост черепа.

После удаления каких-либо острых краев, вставьте воздушный шар катетер предварительно заполнены солевым раствором со всем воздухом эвакуированы. Когда катетер полностью находится в полости черепа, используйте шприц-насос, чтобы начать надувать катетер со стороны примерно 0,1 миллиметра в минуту в течение 10-15 минут. Когда смерть мозга происходит, остановить инфляцию шар катетер и место нагрева одеяло над мышью, чтобы избежать переохлаждения.

После смерти мозга было подтверждено, контролировать и документировать кровяное давление регулярно, вливая 100 микролитров солевого раствора каждые 30 минут, чтобы стабилизировать кровяное давление животного. После четырех часов смерти мозга, исключить любых животных, не бьюсь сердца и урожай органов мыши и тканей, представляющих интерес в соответствии со стандартными протоколами. После индукции смерти мозга, кровяное давление демонстрирует начальный гипертонический пик, за которым следует длительная гипотензивная фаза.

Другим устоявшимся наблюдением является то, что индукция смерти мозга приводит к активации иммунной системы. Действительно, после четырех часов смерти мозга в этой модели, орган-специфической upregulation иммунных маркеров наблюдается на уровне мРНК. После предопределенного периода смерти мозга органы могут быть собраны для их прямого анализа или для последующей трансплантации органов.

Эта модель позволит углубленные исследования влияния мозга смерти индуцированной травмы и уже показали новые идеи в дополнение активации и лейкоцитов миграции.