تحريض الموت الدماغي في الفئران باستخدام مراقبة ضغط الدم داخل الشرايين والتهوية عبر القصبة الهوائية

على الرغم من أن التبرع بعد موت الدماغ المانح هو المصدر الرئيسي لزرع الأعضاء الصلبة ، فإن فقدان وظيفة الدماغ الذي لا رجعة فيه يؤدي إلى تغييرات فيزيائية المرضية التي تؤدي إلى استجابة التهابية نظامية. هذا النموذج murine من تحريض الموت الدماغ يسمح باستخدام مجموعة كبيرة ومتنوعة من الأدوات التحليلية ونماذج خروج المغلوب لدراسة مسارات تنظيم الموت الدماغي. بالنسبة للقسطرة الشريانية بعد التأكد من عدم الاستجابة لدواسة منعكسة وإزالة شعر البطن العلوي، قم بتطهير الجلد المكشوف بنسبة 70٪ الإيثانول واستخدام مقص تشريح لإجراء شق في منتصف الجلد.

باستخدام ملقط، وحاد تشريح الغدد تحت المناظرة والأنسجة العضلية الرقبة وفصل الأنسجة لفضح الشريان السباتي المشترك. مكان ثلاثة 8-0 خيوط الحرير تحت الشريان السباتي المشترك الأيمن ووضع المشبك على الرباط القريب. جلب التوتر في الشريان بحيث يتم تعليق تدفق وإغلاق أكثر رباطة.

أدخل قسطرة شريانية قياس 26 قياساً من خلال ثقب جلدي صغير مُتشكل على الجانب القحفي من الشق. اضغط على القسطرة مع ملقط إذا كان التجويف كبيرًا جدًا للحد من التدفق الخلفي وتأمين القسطرة مع جميع الغرز الثلاثة ، ثم استخدم واحدًا 5-0 أحادية الحساسية غير قابلة للالمساب لإصلاح القسطرة إلى الجلد بالقرب من ثقب الجلد المُسبق. لإجراء استئصال القصبة الهوائية، استخدم ملقط لتشريح العضلات قبل الجراشيب ووضع اثنين 8-0 أربطة حريرية تحت القصبة الهوائية.

أدخل أنبوب التهوية بين اثنين من الغضاريف القصبية لتجنب التهوية من جانب واحد وتأمين الأنبوب مع كل من الرباطات المعدة، ثم إغلاق الجلد مع خياطة تشغيل أحادية 6-0 غير قابلة للتنفس وتهوية الماوس بتردد 150 في الدقيقة وحجم المد والجزر من 200 ميكرولتر. للحث على موت الدماغ في الحيوان التجريبي ، وترتيب الماوس إلى موقف عرضة ، وعقد الجلد مع ملقط ، واستخدام مقص الجراحية لإزالة الجلد من الجمجمة. حفر بئر الفرجار ملليمتر واحد perimedially فوق القشرة الجدارية اليسرى واستخدام ملقط حادة لاختراق جسر الأنسجة النهائية للجمجمة.

بعد إزالة أي حواف حادة، أدخل قسطرة بالون مملوءة مسبقًا بالملوحة المالحة مع جميع الهواء الذي تم إخلاؤها. عندما تكون القسطرة داخل تجويف الجمجمة بالكامل، استخدم مضخة حقنة للبدء في تضخيم القسطرة عند 0.1 ملليمتر في الدقيقة على مدى فترة من 10 إلى 15 دقيقة. عندما يحدث موت الدماغ، ووقف التضخم من القسطرة البالون ووضع بطانية التدفئة على الماوس لتجنب انخفاض حرارة الجسم.

بعد تأكيد موت الدماغ، مراقبة وتوثيق ضغط الدم بانتظام، وغرس 100 ميكرولتر من المالحة كل 30 دقيقة لتحقيق الاستقرار في ضغط الدم من الحيوان. بعد أربع ساعات من الموت الدماغي، استبعاد أي دون ضرب القلوب وحصاد أجهزة الماوس والأنسجة ذات الأهمية وفقا للبروتوكولات القياسية. بعد تحريض الموت الدماغي ، يظهر ضغط الدم ذروة ارتفاع ضغط الدم الأولي تليها مرحلة ضغط الدم لفترة طويلة.

ملاحظة أخرى راسخة هي أن تحريض الموت الدماغي يؤدي إلى تنشيط الجهاز المناعي. في الواقع، بعد أربع ساعات من الموت الدماغي في هذا النموذج، لوحظ رفع الأعضاء الخاصة من علامات المناعة على مستوى مرنا. بعد فترة محددة مسبقا من الموت الدماغي، يمكن حصاد الأعضاء لتحليلها مباشرة أو لزرع الأعضاء اللاحقة.

وسيمكن هذا النموذج من إجراء دراسات متعمقة في تأثير الإصابة الناجمة عن الوفاة الدماغية، وقد كشف بالفعل عن رؤى جديدة في التفعيل والهجرة الكريات البيض.