Модели трансплантации являются ценными инструментами для иммунологических исследований, которые часто требуют хирургической экспертизы. Здесь мы представляем осуществимый подход к гетеротопной трансплантации сердца и сердечной мышцы у крыс. Подчеркивая и упрощая все важные шаги нашей модели, исследователи без хирургического фона должны быть в состоянии освоить эту модель в разумные сроки.
Обе модели трансплантации дают ценную информацию о механизмах толерантности и отторжения и могут применяться в различных видах. У нас есть большой опыт в обучении этой модели для людей без предварительного хирургического обучения. Изучая важные шаги, мы советуем терпение и достаточную практику с умершими животными.
Для донорской эксплантации сердца, после подтверждения отсутствия реакции на педаль рефлекс в анестезии от семи до 22 недель крысы донора животных, применять смазку для глаз и использовать механические клиперы для удаления брюшной и грудной меха. Поместите крысу в положение на спине на нагревательной основе и зафиксните конечности у основания стола с резинками. Дезинфицировать обитуемую кожу 70% этанолом и выполнить медианную лапаротомию.
Вставьте втягиватели в разрез и используйте стерилизованные ватные тампоны, чтобы мобилизовать кишечник на левую сторону донора, чтобы разоблачить нижняя кава вены. Далее прокол нижней вены кавы, чтобы внутривенное введение 500 международных единиц гепарина растворяется в одном миллилитре ледяного изотонического солевого раствора. Остановите кровотечение на проколотом участке после опрокидывания иглы при легком сжатии с помощью ватного тампона.
Инцизовать диафрагму, выполнить боковую торакотомию с обеих сторон донора и приколоть грудную клетку стенки. Удалите перикард и вагальский нерв тупым препаратом с помощью двух держателей микроигол. Для exsanguination, трансект брюшной сосуды и вставить тупую ветвь зонда указал ножницы в поперечной перикардиальной пазухи.
Используйте компресс, чтобы вскрыть восходящую аорту и легочную артерию как можно более дестически при легкой хвостовой тяге сердца. Поместите один 5-0 лигатуры вокруг начальника и нижней вены кавы и легочных вен и затянуть лигатуру шаг за шагом, как dorsally насколько это возможно. Разорвать ткани спинной к лигатуре и извлечь сердце.
Чтобы пронизать высаженное сердце, используйте 18 калибровочных канюли из внутривенного катетера, чтобы промыть 30 миллилитров ледяного, изотонического солевого раствора, дополненного 1000 международными единицами гепарина через восходящую аорту и легочную артерию, прежде чем поместить сердце в 15-миллилитровую трубку солевого раствора на льду. После подготовки от 10 до 14 недель старый получатель крысы, как только что продемонстрировали, мобилизовать кишечник в верхней левой части получателя на теплый, мокрый компресс. И отрегулируйте хирургический микроскоп или достаточную альтернативу.
После мобилизации двенадцатиперстной и проксимальной jejunum, соответственно, используя пять-семь полное увеличение, использовать ватные тампоны и тупое вскрытие подвергать брюшной аорты и нижней полой вены. Используя два держателя микроигол для подвания брюшных сосудов, не повреждая поясничных вен, поместите сосудистый зажим Cooley на сосуды. Используйте 30 до 45 градусов арочные 27 калибровочных канюли для прокола брюшных сосудов.
И используйте ножницы Поттса, чтобы увеличить место прокола в продольный разрез, который соответствует размеру люмена донорских сосудов. Чтобы удалить тромбы и предотвратить послеоперационный тромбоз, пронизыть сосуды солевым раствором и поместить трансплантат в ситус. Использование двух простых прерванных 8-0 монофильтрации не-resorbable швы, исправить донора восходящей аорты к получателю брюшной аорты на черепных и хвостовых углах продольного разреза.
Для анатомозы восходящей аорты донора с брюшной аортой реципиента поместите трансплантат справа от сосудов-реципиентов при выполнении первой половины анатомоза с бегом 8-0 монофиламентный шов. Затем поместите трансплантат слева от сосудов-реципиентов и выполните вторую половину анатомоза. Исправить донорской легочной артерии к нижней вены кавы аналогичным образом с двумя угловыми узлами на черепных и хвостовой углах.
После фиксации донорского сосуда узлами на каждом углу, поместите стежок снаружи внутрь сосуда для запуска интралюминального анатомоза в течение первой половины анатомоза. Перед тем, как присесть шов, поместите еще один стежок изнутри на улицу. Чтобы предотвратить периферическую эмболию после окончания второй половины анатомоза, промыть анатомоз солевым раствором перед затягиванием узла второй половины анатомоза.
Поместите гемостатической марли вокруг обоих анастомозов и осторожно отпустите Кули сосудистого зажима, чтобы трансплантат reperfusion. Управление любым кровотечением с легким сжатием и стерилизованными ватными тампонами. Примерно через 60 секунд сердце должно начать биться.
Тщательно замените кишечник и закройте брюшную фасцию и кожу отдельными непрерывными 3-0 полифиламентами, бегущими швами. В соответствующей экспериментальной точке времени, урожай донорской крысы сердце, как попродемонстрировано, и использовать стерильный скальпель или стерильные ножницы, чтобы измельчить сердце на три на три миллиметра фрагментов. Усваиваете кусочки в 20 миллилитров среды культуры, дополненные 0,5 миллиграммами на миллилитр коллагеназы в течение 30 минут при 37 градусах Цельсия.
В конце пищеварения добавьте ткань в сито с большим пором, удалив при этом культурную среду. Добавьте от пяти до 10 миллилитров изотонического солевого раствора и процедите навоз ткани через сито. А после центрифугирования клеточной подвески дважды, фильтруй ее через 40-метровый клеточный ситечко.
Промыть ситечко с 5 до 10 миллилитров изотонического солевого раствора, чтобы собрать все оставшиеся клетки. А после центрифугации, resuspend изолированных крыс сердечных клеток в солевой раствор в концентрации в пять раз от 10 до пятой клетки на миллилитр. Загрузите один миллилитров шприц с клеточным раствором и поместите обезболивающее животное-реципиент в боковое положение с целевым ухом вверх.
Исправить ухо пальцем и двусторонняя лента, и использовать 27 калибровочных канюли подкожно вводить 20 микролитров сердечной мышечной клетки раствора близко к зрительным капиллярных сосудов в ухо получателя. После соответствующего экспериментального периода наблюдения извлекайте дренажные лимфатические узлы шейки матки и выполняя соответствующие анализы, представляющие интерес для ниже по течению. Сингенные трансплантации выживали до 100 дней без признаков неудачи трансплантата.
Специфическое сочетание донора-реципиента может привести к различным скоростям отторжения гетеротопной пересадки сердца. Криостат разделы отвергнутых сердец выявить увеличение проникновения иммунных клеток эффектора, в то время как сингенные трансплантаты в значительной степени свободны от иммунных клеток. Шейки матки лимфаденэктомии и повторной стимуляции анализы слива клеток лимфатических узлов после устной инъекции клеток сердечной мышцы показывает различные штамма конкретных иммунных реакций на гетеротопной сердечной ткани в алоговых получателей трансплантации, что требует дальнейшего иммунологического анализа, таких как профилирование цитокинов.
Тщательно обрабатывайте сосуды при вставке и извлечении иглы. Не давайте уделять слишком много внимания швам, чтобы предотвратить стеноз. Не накладывайте слишком много швов на каждый анатомоз.
