Это наиболее надежный и чувствительный метод оценки обонятельной чувствительности морских рыб, поскольку он записывает чисто сенсорный сигнал до любой обработки ЦНС. Основными преимуществами этой техники являются ее чувствительность и то, что она может быть легко передана другому виду из другой среды, независимой от внешней солености. Чтобы подготовить контрольную воду, соберите один литр угольной фильтрованной морской воды и используйте рН зонд для проверки рН.
РН должен быть около 8,2. Если это не так, пузырь морской воды с атмосферным воздухом, пока рН 8,2 не будет достигнута. Далее используйте щелочность титратор для измерения щелочности воды, а затем измерить температуру воды и соленость.
Чтобы подготовить воду с высоким содержанием углекислого газа, фильтруем один литр морской воды через фильтры для инактивированного древесного угля, прежде чем пузыриться углекислым газом до достижения желаемого рН. Используйте рН зонд для проверки рН, который должен быть около 7,7, а затем использовать щелочности titrator для измерения щелочности воды и измерения температуры воды и солености. Для определения давления двуокиси углерода как в контрольной, так и в высокоуглеродной воде откройте программу, предназначенную для расчета параметров двуокиси углерода в воде и добавления солености воды, температуры, давления, общей щелочности и значений рН в входное окно.
Затем выберите константы, весы и единицы, и нажмите процесс, чтобы определить давление углекислого газа. После подтверждения соответствующего уровня sedation из-за отсутствия реакции на щепотку хвоста, поместите анестезировалую рыбу на подушку поддержки настроены для модели и место соответствующим размером кремниевой трубки в рот рыбы. Трубка соединена с подводным насосом, а резервуар анестезии, содержащий газированную морскую воду и воду, перекачивается по жабрам примерно на 100 миллилитров в минуту в килограмм.
Затем вставьте земляной штифт в фланговую мышцу и соедините штифт с головной стадией усилителя. Обложка рыбы влажной тканью только с головой подвергаются и положение трубки с системой доставки стимула в ноздрю. Чтобы разоблачить обонятельные нервы, используйте дрель и рассечение микроскопа, чтобы удалить кожу и кость черепа между глазами.
При использовании морского леща, использовать циркулярную пилу, чтобы удалить часть черепа непосредственно над глазами, чтобы просто задний глаза и использовать дрель для удаления кости между глазами. После того, как достаточная кость была очищена, используйте тонкие миппы, чтобы удалить жир и соединительную ткань, переодейляющие обонятельные нервы, не повреждая нервы или сосуды. Очистите электроды перед использованием, подключив их к отрицательному полюсу трехвольтного источника постоянного тока и поместив наконечник в физиологический солевой раствор на 20-30 секунд.
Устойчивый поток небольших пузырьков следует рассматривать исходя из кончика. Подключите электроды вольфрама с покрытием парилена к головной стадии преамплификатора переменного тока переменного тока. После того, как обонятельные нервы подверглись воздействию, используйте микро-манипуляторы, чтобы вставить электроды в соответствующий обонятельный нерв в положении, которое дает максимальную реакцию на стандарт и минимальную реакцию на пробел.
При условии, что вскрытие прошло гладко, критическим шагом является получение электродов в правильное положение. Это может занять некоторое время и включает в себя определенную степень проб и ошибок. Для получения электрофизиологических показаний используйте солоноидный трехпрофильной клапан для настройки системы доставки стимулов, чтобы позволить быстрое переключение с чистой фоновой воды на стимул, содержащий воду, и подключить общую розетку к трубе, несущей воду, к обонятельной розетке.
Поместите одну линию в фоновую морскую воду, а другую в тестовое решение. Подключите драйвер клапана к спусковому крючку аналогового цифрового преобразователь и настройте программное обеспечение, чтобы начать запись на триггерном событии и продолжить в течение определенного периода. Чтобы проверить стабильность препарата, неоднократно записывать и измерять амплитуду комплексного ответа неоднократно со стандартом позволяет одну минуту, чтобы прошло между последовательными стимулами.
Далее, запись обонятельных нервных реакций на аминокислоты в управлении морской водой, и позволяют одну минуту, чтобы прошло между последовательными стимулами, а затем записать ответ на один раз 10 к отрицательной третий молир серин в контроле воды пустой раствор. Затем записывают обонятельные нервные реакции на аминокислоты в морской воде с высоким содержанием углекислого газа. Реакция на раствор с высоким содержанием углекислого газа и реакция на один раз 10 на отрицательный третий молярный серин в контрольном водном растворе.
Здесь показаны типичные реакции на положительные и отрицательные контрольные стимулы, записанные с обонятельного нерва морского леща. В течение примерно одной секунды применения стимула, быстрый рост активности может наблюдаться следуют период размещения в то время как стимул все еще присутствует и возвращение к базовой активности, как только стимул закончился. В отличие от этого, пустой стимул вызывает мало или в отсутствие ответа.
В этой типичной кривой реакции концентрации, можно за наблюдать, что увеличение концентрации запаха может вызвать все большее увеличение активности и, следовательно, амплитуды интегрированных ответов. Планирование нормализованных данных и соответствующая линейная регрессия позволяют оценить порог обнаружения реакций концентрации каждого животного или группы животных. Сигмоидные кривые реакции концентрации могут быть построены полу-logarithmically, что позволяет расчет концентрации одоранта, который вызывает на 50%максимальный ответ.
Важно, чтобы рыба была как можно более здоровой. Например, убедитесь, что жабры адекватно орошаются и что обонятельный эпителий держится влажным во время записи. Одна из наших целей заключается в том, чтобы проследить нервные пути в головном мозге, где сенсорная информация передается.
