Общая цель этого настоящего видео заключается в том, чтобы объяснить протокол двойной прямой инъекции крови в цистерна магна в качестве модели субарахноидального кровоизлияния. Физиология субарахноидального кровоизлияния часто происходит из-за разрыва аневризмы. И сначала мы делаем экстравазию крови в отсек между мозгом и тканью, которая покрывает мозг.
Этот отсек является субарахноидальное пространство. Субарахноидальное кровоизлияние составляет до 7% всех случаев удара. Смертность колеблется от 30 до 50% в демографических исследований и субарахноидального кровоизлияния выживших обычно испытывают когнитивные сиквелы, как дефицит памяти, астения, или расстройства настроения.
Основной причиной высокой распространенности плохого исхода является то, что ишемия головного мозга. Исследования сделали связь между возникновением ишемии в сосудосуживающих крупных мозговых артерий, названный микроскопический вазоспазм, который может быть обнаружен у большинства пациентов в период с четвертого по пятнадцатый день после первого события вздутия живота. Из-за неэффективности нынешних терапевтических вариантов, существует очевидная медицинская потребность в лучшем понимании патологических событий.
Следует проверить сопровождающее субарахноидальное кровоизлияние и новые терапевтические цели, но для этого необходимы разнообразные и стандартизированные модели животных. Разрыв межкраниальной аневризмы в основном отвечает за субарахноидальное кровоизлияние в организме человека, вероятно, трудно сделать доклинологических и человеческих моделей. У животных основные трудности возникают в борьбе с частотой кровоизлияний и распределения крови, но последние исследования сосредоточены на разработке более редиктивных моделей моделей субарахноидального кровоизлияния.
Здесь представляют собой стандартизированную модель мыши двух последовательных инъекций аутологичной артериальной крови наших двух дней в цистерна магна. Основными преимуществами этой модели являются воспроизводимое освоение неинвазивной хирургической процедуры, адаптация качества и количества вводимой крови, а также укрепление кровотечения без резкого повышения внутричерепного давления. Перед началом операции, вы должны положить еще большое количество стеклянных капилляров с помощью микропипта шкив.
Инъекционная пипетка должна иметь внутренний диаметр 0,86 миллиметра и внешний диаметр 0,5 миллиметра. Подготовка искусственной спинномозговой жидкости для фиктивного состояния, как указано в письменном протоколе. Вы должны понимать, что это кислородом искусственной спинномозговой жидкости с 0,22 микрон фильтр аппарата.
Первая очередь нашей модели субарахноидального кровоизлияния заключается в изоляции сонной артерии вдоль трахеи и сборе максимума крови от прокола сонной артерии. После анестезии изофлюраном, проверьте отсутствие рефлексов, зажимая одну или две задние конечности, чтобы позволить установить экспериментальную процедуру. Код один миллиметр шприц с Эприн с помощью 26 калибровочных иглы.
Это предотвратит свертывание крови во время следующих шагов. Взвешивайте каждую мышь точно с помощью электронного баланса. В текущем исследовании, мыши будут иметь вес тела в пределах от 20 до 25 граммов незадолго до операции.
Как ранее объяснялось, индуцированная анестезия оперированных мышей, а затем брить шею и пространство между каждым ухом с помощью подходящего электрического клипера. Проверьте мышь спит и голова мыши хорошо заблокирован. Вводить подкожно 100 микролитров бупренорфина по 0,1 миллиграмма на килограмм с 26 калибровочных игл в нижней части спины, чтобы избежать боли после пробуждения.
Предотвратить сухость глаз с помощью защитного жидкого геля и поддерживать внутрипроводную температуру 37 градусов с помощью автоматического регулируется электрическое одеяло. Перед лечением бритой области с антисептическим раствором, все инструменты, касаясь ткани были стерилизованы и обрабатываются асептически. В первый день, вырезать один сантиметр длиной разрез в задней шее, а затем разделение мышц вдоль средней линии, чтобы получить доступ к цистерна magna.
Нарежьте кончик пустой стеклянной пипетки тонкими ножницами. Затем адаптируйтесь к шприцу, подключенного к гибкому кремниевому разъему. Затем перенесите 60 микролитров крови или искусственной спинномозговой жидкости в 0,5 миллилитровую трубку с использованием точного микропиметра Suck в стеклянную пипетку, 60 микролитров крови для субарахноидального кровоизлияния или 60 микролитров искусственной спинномозговой жидкости для фиктивного состояния.
Для инъекций вставьте пипетку на стереотаксическую раму, используя, например, наше кольцо или и медленно приближайте кончик пипетки к мембране на стыке с цистерной магной. Вставьте медленно наконечник пипетки через атланто-затылочную мембрану в цистерна магна с помощью микроманипулятора стереотаксической рамы. Подключите пипетку к ранее заполненной шприцу, готовой к индукции давления.
Вводить при давлении с низкой скоростью около 10 микролитров в минуту, чтобы избежать острой внутричерепной гипертензии. Во время инъекций внимательно следите за частотой дыхания и ректальной температурой. В конце инъекции, тщательно снять пипетки с помощью микроманипулятора и визуально заботиться нет утечки во время вывода.
Достичь гомеостаза и выполнить два шва с плетеной неаспасимой швовой нитью. Сразу после операции, изолировать и положение мыши в упадке decubitus и накрыть одеялом выживания в открытой коробке на время восстановления. Через 24 часа снова индуцировать анестезию, установить мышь на стереотаксическую раму, как накануне, и с осторожностью удалить швы с помощью микро-ножниц.
Приготовьте как раньше асептик атланто-затылочной мембраны, на применении на бритой области и асептическом растворе с помощью ватного стержня. Вводят, как и накануне, 30 микролитров крови или искусственной спинномозговой жидкости с низкой скоростью. Как уже упоминалось, следите за частотой дыхания и ректальной температурой.
В конце инъекции тщательно смойте пипетки и контролйте отсутствие утечки крови во время снятия. Достичь гомеостаза и выполнить два шва с плетеной абсорбируемой швовой нитью. С первого дня после операции до дня жертвоприношения, вес тела должен быть ежедневно оценивается как чувствительный показатель для общего благополучия.
Он показал значительное снижение массы тела при субарахноидном кровоизлиянии, по сравнению с фиктивными животными, что свидетельствует о длительном процессе восстановления активности и длительных патологических событиях, постсубарахноидном кровоизлиянии. Почему смертность не в фиктивной состоянии? Смертность приближается к 30% на седьмой день в состоянии субарахноидального кровоизлияния, при этом большинство животных умирают на один или четвертый день после операции.
Среди гуманных конечных точек, значительное снижение веса выше 15% от первоначального веса отмечается. Сгорбившись назад "поза, медленные движения, раны, ненормальные вокализации или значительной агрессии также признаки того, что животное страдает. Если какой-либо из этих признаков или сочетание признаков появляется, отслеживание животного усиливается в течение нескольких часов, которые следуют его внешний вид.
Если состояние животного ухудшается в последующий час или не улучшается в течение 48 часов, будет учитываться, что уровень невыносимых страданий достигнут и убийство осуществляется. В этом примере в первый день операции, он может наблюдаться из образца мозга, сгустки крови вдоль больших артерий полигона Уиллис в субарахноидального кровоизлияния субъекта. На пятый день после операции и перед жертвой межсосудистая инъекция индийских чернил позволяет вынашить макроскопический вазоспазм, соответствующий сосудосуживанию крупных мозжечковых артерий, окраска ломтиков мозга гематоксилином и эозином позволяет измерять вазоспазм головного мозга.
Здесь, как показано на этой фотомиографии, можно наблюдать как вазоспазм базилярной артерии. В этой модели отвлечения прямой инъекции крови в цистерна магна, мы недавно продемонстрировали церебральный вазоспазм больших мозговых артерий, церебральных сосудистых фибрилляции осаждения, и апоптоз клеток, сопровождается измененными сенсорными, двигательными и когнитивными функциями у мышей. Таким образом, это делает эту модель проверенной и характеризуется для краткосрочных и длительных событий, после субарахноидального кровоизлияния.
Он должен идеально подходить для перспективной идентификации новых целей и для исследований эффективных терапевтических стратегий против субарахноидального кровоизлияния связанных осложнений.
