Мы предоставляем протокол для установления массивного понтинового кровоизлияния у крысы. Эта модель проста в установке, повторяема и очень успешна. Дистиллированная инъекция аутологичного крысиного метода может быть использована для кровоизлияния в любую из областей мозга.
Люди, которые хотят попробовать эти методы, должны научиться использовать стереотаксическую рамку и быть знакомыми с анатомией понтий. Начните с размещения хирургической драпировки над мышью. Сделайте разрез скальпелем вдоль отмеченной средней линии.
Используйте ватный тампон, чтобы удалить любую потенциальную кровь. Затем поместите кусок щипцов на каждую сторону лоскута головы, чтобы обнажить череп. Окуните ватный тампон в 0,9% физиологического раствора и аккуратно удалите соединительные ткани из кости черепа.
Используйте маркерную ручку, чтобы отметить центральную точку брегмы в качестве точки начала. Выполняют краниотомию с помощью микродрели, протекая осторожно. По завершении снимите микродрель со стереотаксической рамки.
Вставьте 100-микролитровый шприц Hamilton в стереотаксический держатель. Включите переключатель ТНВД. Нажмите кнопку быстрого вдоха.
Затем аспират раствора гепарина до 100 микролитров и полностью слить его. Нанесите хлоргексидин и 75% спиртовой хирургический скраб на всю сказку от корня до кончика не менее трех раз, чтобы продезинфицировать кожу, смягчить роговость и расширить хвостовую вену, чтобы увеличить частоту успеха инъекции. Прикрепите иглоукалывание кожи головы к шприцу в один миллилитр, затем вставьте иглоукалывание кожи головы в боковую хвостовую вену в трех сантиметрах от кончика хвоста и возьмите 150 микролитров крови.
Извлеките иглоукалывание кожи головы из одного миллилитра шприца и перенесите кровь в пробирку. Работа быстро, чтобы предотвратить свертывание крови. Смените хирургические перчатки.
Выберите режим вывода средств. Установите громкость на 100 микролитров и установите скорость 200 микролитров в минуту. Нажмите кнопку «Бег» и аспирировать 100 микролитров крови в шприц Гамильтона.
Переключитесь в режим infuse и установите скорость на один микролитр в минуту. Выдвигайте шприц до тех пор, пока наконечник не достигнет 9,2 миллиметра ниже поверхности мозга и введите первые 10 микролитров крови. Нажмите на кнопку запуска.
Остановите инъекцию и оставьте шприц в положении на 20 минут, чтобы предотвратить поступление крови в субарахноидальное пространство. Втяните шприц до тех пор, пока наконечник не прибудет на девять миллиметров ниже поверхности мозга, затем возобновите инъекцию с той же скоростью один микролитр в минуту, пока остаточная кровь не будет введена полностью. Оставьте шприц в положении на 10 минут, чтобы избежать обратного кровотока.
Медленно извлеките шприц из мозга. Затем используйте костный цемент, чтобы покрыть отверстие в краниотомии. Когда цемент высохнет, швом раны с четырьмя нулевыми полиамидными шовными нитями.
После сшивания трех-четырех швов завязывают 2 по одному-одному стандартные хирургические узлы. Наблюдайте за крысой каждые 15 минут, пока она полностью не оправится от анестезии, а затем верните ее в исходную клетку с грелкой под ней. Обеспечьте крысе свободный доступ к пище и воде.
В общей сложности 25 животных использовались для контроля 30 микролитровых, 60 микролитров и 100 микролитровых инъекций крови. Поведенческие тесты проводились в первый, третий, седьмой и 14-й дни после операции. Понтинское кровоизлияние вызывало неврологический дефицит, такой как снижение рефлекса роговицы и кружение.
Инъекция 100 микролитров крови также индуцировала миотонию. МРТ-сканирование проводилось через 24 часа после операции. В группах инъекций крови кровоизлияние было обнаружено как обод с ипоинтенсом с ISO до слегка гиперинтензивного ядра в базиликовой части прудов.
Объем кровоизлияния увеличивался с объемом инъекций. Крыс приносили в жертву через 24 часа и 14 дней после операции. И были сделаны два миллиметровых сечения.
Было обнаружено кровоизлияние, окружающее место инъекции и распространяющееся в основании прудов. Наблюдался небольшой отек вокруг кровоизлияния в группе инъекций крови 100 микролитров. Некоторые из крыс были принесены в жертву через три дня после операции, а парафиновые срезы были сделаны для окрашивания HE.
Результаты показали, что в группах инъекций крови воспалительные клетки, обогащенные в зоне паракроизлияния, гемоглобин оставался содержащимся с неповрежденными эритроцитами. При попытке этого протокола обязательно запомните положение инъекции. Этот метод может быть использован для индуцирования кровоизлияния в любую конкретную область мозга.
