Витамин С является показателем питательной ценности фруктов и овощей. Нам нужен простой и надежный метод количественной оценки, особенно в салате, наиболее потребляемых листовых овощей во всем мире. Этот метод предотвращает деградацию витамина С, а также обеспечивает повышенную экстракции и быструю, надежную количественную оценку как аскорбийских, так и дегидроаскорбных кислот, благодаря своей точности и чувствительности.
Этот метод может быть использован в пищевой технологии для создания питательных этикетки факт, в медицине для изучения воздействия пищи на здоровье и в растениеводства, для увеличения содержания витамина С в различных видах. Демонстрация процедуры с Инес Медина Лосано, будет Хосе Анхель Aranjuelo и Arantzazu Кастелланос, два аналитика из моей лаборатории. Чтобы подготовить образцы растений, собрать хотя бы один внешний и один внутренний лист на растение и немедленно заморозить листья в жидком азоте, прежде чем поместить их в минус 80 градусов по Цельсию хранения.
Чтобы лиофилизовать замороженные образцы растений, поместите незакрытые пробные трубки на подносы в камере замораживания химчистки лиофилизатора, и запрограммируйте лиофилизатор, как указано. Поддержание температуры конденсата при температуре минус 80,2 градуса по Цельсию, а вакуумная константа на уровне 112 Когда материал полностью высохнет, добавьте 10 миллиметровых шариков из нержавеющей стали в лиофилизированные образцы, в 20 миллилитровых полипропилевых труб. И используйте Multi-Tube Vortexer, в соответствующее время и интенсивность, чтобы измельчить образцы в тонкую пыль.
Для приготовления стандартных растворов аскорбиновой кислоты и разбавления весят ровно 10 миллиграммов стандарта аскорбиновой кислоты на точном балансе. И на 90 миллилитров мобильной фазы к образцу. Используйте магнитный мешалку, чтобы растворить образец, и использовать объемную колбу, чтобы точно измерить 100 миллилитров полученного раствора.
Добавление дополнительной ультрапурной воды, подкисленной при рН 2 с кремовой кислотой, по мере необходимости. Затем приготовьте пять разбавлений из бульона, чтобы получить кривую калибровки. Работая при низкой интенсивности света, добавьте 50 миллиграммов лиофилинизированного грунтового образца и пять миллилитров растворителя экстракции в 15-миллилитровую полипропиленовую центрифугу и вихрем раствор в течение пяти секунд.
После встряхивания образца в течение 10 минут на орбитальном шейкере при 2000 оборотов в минуту, перенесите трубку в ультразвуковую ванну на 10 минут, при комнатной температуре и соберите образец путем центрифугации. Затем процедите супернатант через 0,22 микрона регенерированный целлюлозный фильтр, в пять миллилитров янтарного флакона, чтобы извлечь как аскорбиновые и дегидроаскорбные кислоты в экстракте один. Чтобы подготовить разбавление для определения концентрации аскорбиновой кислоты в образцах листьев, добавьте 200 микролитров экстракта один, и 800 микролитров ультрапурной воды в два миллилитров янтарного жидкого хроматографического флакона, и закрыть флакон с PTFE / силиконовой вилкой.
Для общей экстракции аскорбиновой кислоты перенесите 200 микролитров экстракта в двухми миллилитровый янтарный жидкий хроматографический флакон и добавьте 200 микролитров уменьшающих растворов к флакону. Закройте флакон вилкой и вихрем раствор в течение пяти секунд. После 30-минутной инкубации при комнатной температуре, защищенной от света, используйте 200 микролитров 0,4 моларной серной кислоты, чтобы остановить реакцию и стабилизировать аскорбиновую кислоту, до кислого рН.
Для подготовки разбавления для определения общей концентрации аскорбиновой кислоты в образцах добавьте 400 микролитров ультрачистой воды, чтобы в общей сложности экстракт аскорбиновой кислоты два. Закройте флакон вилкой. По крайней мере за час до начала эксперимента подтвердите, что все рабочие решения были загружены в систему UPLC, и включите три модуля UPLC.
Когда процесс внутренней калибровки закончится, откройте программное обеспечение и загрузите инструментальную программу. После загрузки программного обеспечения нажмите кнопку «Менеджер по работе с другими» и нажмите кнопку «Правая мышь», чтобы выбрать консоль запуска, чтобы получить доступ к консоли управления UPLC. Нажмите системы, управления и запуска, чтобы приступить к подготовке и стабилизации инструмента UPLC, и нажмите Премьер Solvents, ЗСМ, проверить A, B, C, D, Seal Wash и продолжительность премьер, более пяти минут, чтобы очистить все линии UPLC, по крайней мере пять минут.
Нажмите SM, проверьте Wash Solvent более 45 секунд. Проверьте Очистка Solvent, и 35 циклов, чтобы очистить и очистить инжектор. Чтобы уравночные настройки UPLC к условиям метода, проверьте Equilibrate к методу и ЗСМ, и установите поток до 0,3 миллилитров в минуту.
Solvent A до 2%solvent B до 0%solvent C 98%и растворитель D до 0%Все еще в Equilibrate к методу и SM и установить образец до 5 градусов по Цельсию, и столбец до 30 градусов по Цельсию. Все еще в Equilibrate к методу и другому, выберите лампу дальше, и щелкните старт. Разрешить оборудование стабилизировать, по крайней мере час.
Чтобы проверить стабильность, щелкните Стартовая консольная система иSM и выберите давление системыSM, только чтобы проверить давление в столбце. Если нет идентифицируемых тенденций в изменении давления, и дельта значение составляет менее 10 фунтов на квадратный дюйм давления, в быстрый стартовый экран, заполнить матрицу с именами стандартов и образцов, которые будут проанализированы. Чтобы определить концентрацию аскорбиновой кислоты в стандартах, ввимите пять микролитров каждого разбавления в инструмент UPLC и провести хроматографию, начиная с наиболее разбавленного, до наиболее концентрированного раствора, как указано в таблице.
Для определения аскорбиновой кислоты и общей концентрации аскорбиновой кислоты в образцах листьев, ввимите пять микролитров разбавленного экстракта один и извлечь два соответственно, в инструмент UPLC для хроматографического анализа. Для расчета концентрации аскорбиновой кислоты и общей концентрации аскорбиновой кислоты в программном обеспечении щелкните quickstart, Browse Project, Channels, название стандарта или образца и канал PDA One, 245 нанометров на 1,2 нанометров. Чтобы открыть стандартную и выборку хроматограмм, нажмите на отправную точку хроматограммы и перетащите ее до конечной точки, чтобы интегрировать соответствующий пик в стандарты и образцы.
Затем используйте данные из стандартных разбавлений аскорбиновой кислоты, чтобы построить кривую калибровки, представить хроматографически определенные значения абсорбции и интерполировать значения абсорбции образца, чтобы получить аскорбиновую кислоту и общую концентрацию аскорбиновой кислоты, согласно формуле. Квантификация витамина С в матрицах Лактука требует разработки хроматографического подхода, который может обеспечить надежные результаты. Здесь можно наблюдать хроматограмму, полученную в результате неоптимизированного протокола представления и пика аскорбиновой кислоты, вместе с неопознанным на шахтером плече.
Тем не менее, после улучшения экстракции и хроматографических условий, решен аскорбиновой кислоты пик без помех неизвестных соединений может быть достигнуто. Кроме того, использование ультрафиолетового оборудования UPLC, а не HPLC ультрафиолетового, сокращает время удержания и работы. Вмешательства в пики аскорбиновой кислоты, последовательно приводят к недооценке содержания витамина С, из-за недостаточного разделения во время хроматографического процесса.
По мере того, как перекрывающиеся пиковые области интегрируются вертикальным падением в самой глубокой точке между ними. Кроме того, использование неоптимизировали протокол предотвращает извлечение любого полезного вывода, из результатов. Поскольку все образцы, как представляется, имеют аналогичное содержание витамина С, в любой из его форм.
Напротив, использование оптимизированного протокола позволяет обнаруживать статистически значимые различия между различными типами образцов. Будьте уверены, чтобы собрать несколько образцов, чтобы сохранить образцы правильно, чтобы свести к минимуму воздействие образца на окисляющие агенты и количественно обе формы витамина С.Общее содержание витамина С может быть количественно не только в любых видов растений, но и, в любой плод в любых фруктов и овощей, или даже обработанные пищевые продукты с несколькими изменениями техники.
