Общая цель этой парадигмы заключается в оценке сложного оборонительного поведения у грызунов. Этот протокол имеет важное значение, поскольку он облегчает исследования переходов между оборонительным поведением, что делает его идеальным для исследователей, заинтересованных в изучении сложных адаптивных ответных мер на угрозу. Этот протокол использует временно точные стимулы состояния, чтобы вызвать переход между оборонительными ответами, что позволяет нам изучать как, обусловленное замораживание и поведение полета в рамках отдельного предмета.
Использование этой модели, чтобы раскрыть механизмы оборонительного поведения может обеспечить понимание ПТСР связанных дисфункции и панических расстройств и может помочь в развитии новых терапевтических средств. Чтобы настроить поведенческие протоколы, в программе, определить SCS, установив стимулы, которые будут доставлены как либо десятисекотный чистый тон, или десятисекотный белый шум, и определение межпроблемных интервалов, которые будут представлены псевдо-случайно после каждого испытания. Чтобы настроить отслеживание программного обеспечения, поместите тестовую мышь в каждом соответствующем контексте, определите центр тяжести и отрегулируйте размер контура.
Используйте размер камер и размеры пикселей камеры для определения коэффициента калибровки. Затем создайте импульсный код TTL для синхронизации маркеров событий центрального компьютера с их событиями в режиме реального времени. Перед началом эксперимента включите контроллер коробки кондиционирования страха, шокер и программное обеспечение для записи видео.
Установите верхний динамик над контекстами для доставки слуховых стимулов на 75 децибел, и установите программируемый аудиогенератор для генерации слуховых стимулов по заранее определенному графику. Подтвердив, что тон и белый шум функционируют, установите систему сбора данных и транспортируют трех-пятимесячных мышей мужского или женского пола в кондиционированную комнату. Перед началом предусловия испытания, очистить диаметр 30 сантиметров, 30 сантиметров ясно цилиндрической плексигласовой камеры с 1%acetic кислоты, которые будут использоваться в качестве контекста камеры.
Для предварительного предварительного условия поместите мышь в контекст А и позвольте ей акклиматизироваться в течение трех минут, прежде чем подвергать мышь четырем 20-секундными тропам SCS со 90-секундной средней псевдоугадной межпробной интервалом. После 10 минут акклиматизации перенесите одну мышь в камеру Context A и немедленно активируйте систему кондиционирования страха и программы сбора данных. Перед началом эксперимента по кондиционированию страха очистите прямоугольный корпус высотой не менее 35 сантиметров, прямоугольный корпус высотой 25 на 30 сантиметров с полом электросети с 70%-ным этанолом, который будет использоваться в качестве камеры Context B.
Затем соедините шокер с электрическим сетчатым полом камеры Context B и определите частоту, начало и продолжительность ударов в соответствующей компьютерной программе. Когда все параметры будут установлены, убедитесь, что интенсивность удара доставляется должным образом как от шокера, так и от пола сетки. В два и три дня поместите мышь в камеру Context B в течение трех минут, прежде чем подвергать животное пяти спариваниям SCS совместного прекращения с одной секундой, 0,9 миллиампер AC удар ноги и 120-секундный средний межрасовый интервал.
В конце сеанса положите мышь обратно в домашнюю клетку. В зависимости от цели эксперимента, подвергать животных отзыв сессии, на четвертый день, поместите мышь в контексте камеры в течение трех минут, прежде чем представить животное с четырьмя испытаниями SCS без ноги шок с 90-секундный средний псевдо-случайный межпроверный интервал в течение 590 секунд, чтобы проверить страх животного Напомним ответ. Или, чтобы проверить на вымирание страха, на четвертый день, поместите мышь в камеру Context B в течение трех минут, прежде чем подвергать животное 16 испытаний SCS без удара ногой с 90-секундным средним псевдо-случайным межпробным интервалом в течение 1 910 секунд.
Для количественной оценки поведения мыши, в конце эксперимента, иметь наблюдателя слепой к анализу оценка записанных видео для замораживания поведения с помощью автоматического замораживания детектор пороговых следуют кадр за кадром анализ изменений пикселей. Определить замораживание как полное прекращение телесных движений, за исключением тех, которые необходимы для дыхания в течение как минимум одной секунды. Оценка прыжок в качестве примера, когда все четыре лапы покинуть пол, в результате чего вертикальное и / или горизонтальное движение.
При анализе всего сегмента экспортировать отмеченный файл с маркерами замораживания, скачка и события и извлекать соответствующие события из определенных периодов времени, представляющих интерес, в электронную таблицу. Чтобы рассчитать продолжительность замораживания, вычесть время начала с конечного времени для каждого соответствующего пробного периода. Сумма общее количество прыжков от определенной продолжительности судебного разбирательства.
Чтобы рассчитать скорость мыши, отслеживайте координаты из кадра за кадром XY оси движения центра тяжести мыши. Чтобы рассчитать баллы полета, разделите среднюю скорость во время каждого SCS на среднюю скорость в течение десяти секунд до SCS, и добавить одно очко для каждого побега прыжок. Оценка полета одного указывает на отсутствие изменений в поведении рейса по отношению к периоду до SCS.
Затем проанализируйте данные для статистической значимости с помощью соответствующей программы статистического анализа. Презентации SCS в предаммузентной сессии не вызывают реакции на полет или замораживание у мышей. Поведенческий анализ во время кондиционирования показывает, что тон компонент SCS значительно повышает замораживание по сравнению с замораживанием во время предварительного SCS.
Полет оценки значительно изменилась в течение сессий, и мыши демонстрируют более высокие скорости и больше прыжков на белый шум кий по сравнению с сигналом тон. Мыши показывают четкий переход оборонительного поведения, выявив более низкие баллы полета во время тона и более высокие баллы полета во время Белого шума, с противоположным наблюдается для замораживания ответов. Мыши подвергаются 16 испытаний вымирания подготовки демонстрируют быстрое вымирание условный полет, с борьбой оценки в течение первого блока из четырех испытаний измерения выше во время белого шума по сравнению с сигналом тон.
В конце сеанса вымирания поведение полета больше не вызывается ни одним из сигналов. Замораживание тон значительно выше, чем замораживание белого шума для первого блока из четырех испытаний во время вымирания. Тон вызванных замораживания уменьшается в течение 16 испытаний вымирания, в то время как увеличение белого шума опосредованного замораживания наблюдается.
В сессии Recall воздействие белого шума в нейтральном контексте не вызывает полета, так как баллы полета ниже одного. Скорее, презентации White Noise в нейтральном контексте вызывают замораживание ответов, которые выше, чем те, которые вызваны тоном. Важно, чтобы очистить контекст во всем, и очень важно, чтобы проверить амплитуду удара и уровень звукового давления, прежде чем начать эксперимент.
Эта парадигма в настоящее время используется группами, которые заинтересованы в понимании сложности оборонительного поведения, и могут быть использованы для дальнейшего нашего понимания оборонительных действий выбора.
