Культура эксплантата 3-D хвоста для изучения сегментации позвоночных у рыбок данио

3-D хвоста рыбки данио позволяет нам использовать прозрачность эмбрионов рыбок данио в полной мере во время развития сомита и сегментации позвоночных. Наполните пустой брачный резервуар водой рыбной системы. Очистите ситечко системной водой.

Поднимите барьеры между спаривающимися парами. Выборочно перемещайте пару рыб в пресноводный аквариум. Собирайте эмбрионы в ситечке посредством переноса воды с пустым резервуаром.

Промыть собранные эмбрионы водой рыбной системы и перевернуть на чашку Петри. Этанол-глазурные инструменты для рассечения. Сделайте два слоя лент на слайдах.

Вырежьте горизонтальные стороны глубоких камер. Полные камерные разрезы с вертикальными сторонами. Снимите ленту с поверхности камеры.

Залить клеточную культурную целлюлозу в пробирку. Смешать кальция хлорид 2,8 миллимолярной конечной концентрации. Добавьте раствор антибиотика.

Аликвотная рассеченная среда в отдельной трубке. Дополнйте фетальную быжью сыворотку, чтобы сделать среду для культивирование тканей. Декоррить эмбрионы иглами.

Промыть эмбрионы в пресноводной посуде и собрать их для эксплантирования. Стабилизируем эмбрион иглой и начинаем дейокирование. Обрежьте оставшиеся ткани.

Перенесите экспланты на крышку. Выровньте ткань и высосывайте лишнюю жиму с помощью пипетки. Поместите крышку на питательную среду, содержащую скользящую камеру.

Поместите ткань эксплантата на салфетку. Нанесите погружное масло на цель. Установите слайд-камеру на микроскоп.

Настройка лазерных каналов для получения изображения. Проверьте пределы z-слоя образца. Настройка временных изображений и z-слоев.

3-D хвостовая эксплантная система сохраняет интеграцию клеток с хвостовой почкой и избыточное удлинение нетронутыми, как целые эмбрионы. Также можно остановить избыточное удлинение, химически активировав поверхность коллагеном одного типа. 3-D система эксплантов хвоста рыбки данио позволяет нам использовать прозрачность эмбрионов рыбок данио, позволяя нам получать изображения с высоким разрешением и почти объективной микроскопией.

Кроме того, это позволяет отделить избыток удлинения от морфогенной сигнализации, а также управлять источниками сигналов морфогена простыми методами рассечения.