Ретроградная инфузия рядовидной железы через проток Стенсена у нечеловеческого примата для векторной доставки генов

Этот протокол важен, потому что он подробно демонстрирует процедуру инфузии ретроградной слюнных желез. Процедура может быть использована для различных медицинских причин, таких как векторная иммунопрофилакзия или генная терапия. Эту технику легко освоить и воспроизвести.

Авторам удалось успешно выполнить эту процедуру во многих случаях, несмотря на то, что они не являются челюстно-лицевыми хирургами и не имеют такого опыта. После обезболивания используют зубные лупы для увеличения и идентифицируют правоушительный сосочек или отверстие протока Стенсона на задней щеке, прилегающей к верхнему второму моляру. Осторожно расширьте околоушный сосочек, поместив точку конического расширителя в центр или отверстие сосочки, и поверните расширитель назад и вперед в течение примерно 20-30 секунд.

Затем с помощью пинцета удерживайте отмеченный конец полиэтиленовой трубки, прикрепленной к инфузии, содержащей шприц, примерно на 0,5 сантиметра от дистального конца и осторожно вставьте кончик трубки в расширенный сосочек. Осторожно выдвигайте трубку небольшими вращающимися движениями, чтобы помочь трубам скользить, с последующей перенастройкой пинцета на 0,5 сантиметра ранее к предыдущему захвату. Повторяйте этот процесс до тех пор, пока двухсантиметровая отметка не достигнет сосочка.

Далее, чтобы запечатать околоушный сосочек и уменьшить разлив настоя обратно в ротовую полость, нанесите цианоакрилат на щеку вокруг сосочки и на вставленную трубку. Как только цианоакрилат высохнет, медленно вводите инфусат в течение пяти минут со скоростью 100 микролитров в минуту. После того, как инфузия будет завершена, оставьте трубку на месте в течение не менее пяти минут, тем самым сохраняя проток герметичным и позволяя инфузии оставаться в приушной железе.

Наконец, удалите трубку с мягким вытяжением, и цианоакрилат будет свободно тянуть трубку. Рентгеноскопия с использованием радиоконтрастной инфузии продемонстрировала разветвление раствора через проток Стенсона и в приотушную железу. Иммуно как химический анализ правоушной железы выявил положительное окрашивание для EGFP как в проточных, так и в ацинарных клетках, что указывает на успешную трансдукцию и транскрипцию в обоих типах клеток.

Основной проблемой в этой процедуре, вероятно, является введение полиэтиленовой трубки в сосочек, что должно быть сделано очень мягко и медленно.