Предыдущие протоколы для мышиных моделей перитонеального диализа страдают от ограничений, исключающих их долгосрочное использование. Эти ограничения, такие как катетерная спираль и смещение, рассматриваются в этом исследовании. Данная методика предотвращает неисправность катетеров БП по механическим причинам, позволяя использовать их в течение более длительного времени для изучения патологий, таких как перитонеальный фиброз.
Этот метод обеспечит лучшую модель мыши для исследования молекулярного патогенеза и новых терапевтических средств перитонеального фиброза. Ключевое ограничение БП у людей. БП является основой заместительной почечной терапии у педиатрических пациентов с ESKD.
Эта оптимизированная модель обеспечит лучший испытательный стенд для изучения всех проблем с БП у людей. Генерация животной модели имеет кривую обучения. Это пошаговое видео поможет человеку в реализации этой техники для создания прочной модели для перитонеального диализа успешно.
Для начала поместите полностью обезболенную восьми-12-недельную мышь C57 black/6J в левое боковое положение. После бритья мыши, как указано в рукописи, продезинфицируйте хирургическую область, обнажив правый фланг мыши для нагревательного одеяла. Затем наденьте стерильную хирургическую драпировку на мышь.
Назначьте карман порта доступа на один сантиметр выше хвоста мыши. Удерживайте сегмент установки недоминирующим указательным и большим пальцами над назначенной областью возле хвоста. Поместите катетер над кожей и оцените место для введения трубки катетера в брюшной полости.
Затем отметьте назначенное место для вставки трубки, соблюдая минимальный изгиб трубки вблизи передней средней линии. Проткните боковое отверстие над рамой секции резервуара с помощью мышиного ушного бирки. Сделайте горизонтальный разрез кожи шириной в один сантиметр на один сантиметр выше хвоста.
Затем тупо рассекните подкожную плоскость от нижележащего мышечного слоя, чтобы сделать мешочек для размещения катетера, чтобы обеспечить свободное нахождение установочного порта в идеальном кармане порта. Мимо шва 3-0 из индивидуального бокового отверстия. Закрепите входное отверстие к мышечному ложу, затянув пройденный шов, сохранив ход трубки цефаладой.
Сделайте сантиметровый разрез над формально обозначенной областью около средней линии. Поместите свободный шов из кошелька с 4-0 круглым рассасывающимся швом вокруг разрезанной мышцы брюшной стенки. Сделайте сантиметровый разрез над мышечным слоем близко к правой средней линии и пройдите проксимальный войлок катетера внутри разреза.
Пропустите катетерную трубку через подготовленный тракт. Затяните подготовленный шов кошелька вокруг трубки, удерживая второй войлок вне кошелька над мышечным слоем, и закройте кожу 3-0 рассасывающимися швами. Убедитесь, что установленный катетер функционирует.
Проверьте функцию с помощью одного миллилитра шприца, прикрепленного к конкретной игле Huber для порта. Введите обычный физиологический раствор в установочный порт. После подтверждения плавного течения с нулевой толерантностью к сопротивлению закройте разрезы кожи вокруг резервуара порта 3-0 рассасывающимися швами.
Войдите в порт с помощью иглы Huber и введите 100 микролитров обычного физиологического раствора в порт для подтверждения патентного курса. Затем вводят 200 микролитров липополисахарида, а затем 100 микролитров физиологического раствора для трубчатого орошения и убедитесь, что нет сопротивления. После семи дней инъекций ЛПС и двух недель имплантации катетера запланируйте биопсию брюшины.
После подтверждения успешной анестезии сделайте разрез кожи средней линии от мочевого пузыря до субофоидного. Затем перфузируйте субфасциальную плоскость холодным PBS. Убедитесь, что плоскость полностью рассечена, не нарушая целостности брюшины.
Анализ окрашенных гематоксилином и эозином участков показал существенное увеличение внеклеточного матрикса, или ECM, в подбрюшинном пространстве. Средний ECM в субперитонеальном пространстве контрольных мышей был вдвое меньше, чем у мышей, подвергшихся воздействию LPS. Трихромовое окрашивание Массона обнаруживает фиброз, измеряемый как плотность интенсивности, нормализованная по площади поверхности.
Измененную сосудистость и расширение подбрюшинного пространства анализировали с использованием маркера эндотелиальных клеток CD31 и измеряли как интегральную плотность на случайно выбранных изображениях поля высокой мощности. По сравнению с контролем, мыши, индуцированные ЛПС, показали трехкратное увеличение субперитонеального фиброза, примерно восьми-девятикратное увеличение васкулярности и двукратное увеличение суббрюшинного пространства, отмеченного как SP. Поместите катетер над кожей и отметьте точку для введения катетера, избегая при этом изгиба трубки.
Вставка должна быть рядом с внутренней средней линией. Обеспечение более прочного метода установки катетера для мышей PD позволит исследователям разрабатывать и проводить долгосрочные эксперименты для зондирования и выявления разрушения перитонеальной мембраны.
