Протокол сочетает в себе мышиную модель аневризмы брюшной аорты, напоминающую установленное заболевание человека, и повторяющееся лечение с помощью внутривенного катетера. Для решения клинической задачи необходимо блокировать прогрессирование аневризмы. Протокол обеспечивает полный рабочий процесс для тестирования лекарств для уменьшения прогрессирования аневризмы у мышей, включая исчерпывающую информацию о расширении объема диаметра аорты и морфологии.
Плюс 3D УЗИ. 3D-ультразвук может быть адаптирован для измерения инфраренальной аорты, где аневризмы развиваются в моделях мышей с меньшим количеством вкусов. Катетеризация яремной вены может быть использована для любого набора внутривенных инъекций.
После обезболивания 12-14-недельного возраста APOE с дефицитом почтовой мыши сбривают небольшой участок на верхней левой стороне спины, над лопаткой, наносят 10% раствор повидона йода для дезинфекции бритого участка. Сделайте сантиметровый поперечный разрез в коже верхней части спины скальпелем между средней спинной и левой лопаточной линией. Удерживая кожу щипцами и используя тупые изогнутые ножницы.
Сделайте подкожный карман, подталкивая к левой задней конечности. Откройте ножницы и вытащите открытые ножницы из разреза, чтобы расширить карман. Осторожно вставьте насос в карман с замедлителем потока к хвосту, чтобы свести к минимуму потенциальное вмешательство ангиотензина два, высвобождаемого местом разреза.
Затем закройте рану 4,0 рассасывающимися прерванными швами. Использование системы сосудистого доступа. Подготовьте катетер, разрезав три французские стороны на нужную длину и протолкнув катетер над металлическим соединителем 22 калибра системы сосудистого доступа или VAS с перекрытием не менее трех миллиметров.
Поместите алюминиевый колпачок на кнопку, чтобы защитить порт. Сбрите мех с правой стороны шеи на вентральной стороне и правой стороне верхней части спины анестезированной мыши. Затем нанесите раствор повидона йода для дезинфекции бритого участка.
Для приготовления яремной вены сделайте поперечный суперключикулярный разрез кожи длиной 0,5 сантиметра с правой стороны шеи над правой ключицей. Используйте тупой микрохирургический пинцет для разделения соединительной ткани и жира, обнажающего наружную яремную вену. Избегайте разрыва мелких кровеносных сосудов в жире.
Изолируйте пять миллиметров сосуда близко к грудным мышцам. Затем притуплите рассеченную ткань под вену с помощью изогнутого микродвижета и пройдите через две-три из 6,0 шелковых лигатур. Подтяните лигатуры и добавьте каплю физиологического раствора в участок.
Для имплантации кнопки переверните мышь и поместите ее в положение лежа. Нанесите раствор повидона йода для дезинфекции бритого участка. Сделайте сантиметровый сагиттальный разрез на верхней части спины скальпелем между средней спинной и правой лопаточной линиями.
Затем используйте тупые изогнутые ножницы, чтобы сделать круглый карман немного больше размера VAS вокруг места разреза тупым рассечением. Используйте тупые изогнутые ножницы, чтобы туннелировать краниально через правое плечо к вентральному разрезу на шее, слегка открыв ножницы. Затем вытащите открытые ножницы наружу и повторите действие по мере того, как оно вдавливается дальше.
Как только туннель достигнет вентрального разреза, пройдите через хирургические зажимы от вентрального до дорсального разреза. Прикрепите три французских конца катетера к зажиму и потяните катетер через туннель так, чтобы он вышел из вентрального разреза шеи, а VAS был на месте на спинном разрезе. Затем вставьте хирургический войлочный диск VAS подкожно в разрез на спине.
Отстегните проверку катетера на проходимость с помощью вилочного конца инструмента для обработки, чтобы снять защитный алюминиевый колпачок, и используйте магнитный конец, чтобы удерживать кнопку и вводить физиологический раствор или PBS с помощью одного миллилитра шприца, прикрепленного к соответствующему инжектору, пока жидкость не просочится с одного французского конца. Нажмите кнопку хвостом в кармане и закройте кожу над войлочным диском ВА под фланцем VAS двумя четырьмя прерванными зубами. Для катетеризации вен переверните мышь обратно в положение лежа на спине и добавьте каплю физиологического раствора на сторону разреза.
Разделите лигатуры и свяжите первую лигатуру вокруг катетера и яремной вены двумя-тремя узлами как можно более черепно, чтобы завязать вену и закрепить катетер наружу. Переместите вторую лигатуру как можно ближе к грудным мышцам. С помощью микроножек разрезают диагональный угол для создания острого конца так, чтобы три-пять миллиметров катетера находились в вене.
Затем проткните отверстие в вене с помощью иглы 27 калибра, прикрепленной к одномилитровому шприцу, заполненному физиологическим раствором, потянув за закрепленную черепную лигатуру и протолкнув иглу параллельно вене. Затем вставьте катетер в вену таким же образом, потянув за закрепленную черепную лигатуру и скользя катетером в вену с помощью изогнутого пинцета. Толкайте катетер до тех пор, пока он не выровняется с веной.
Завяжите вторую лигатуру над вставленной катетером областью с двумя-тремя узлами и проверьте, чтобы не было утечки крови. Срежьте лишний конец обеих лигатур микроножными ножницами и добавьте каплю физиологического раствора. Затем закройте кожу 4,0 рассасывающимися прерванными швами.
Введите мышам желаемый объем ингибитора или физиологического раствора PBS, как показано ранее. Поддерживайте положительное давление на плунжер при отсоединении шприца от VAS. Следите за мышами после выздоровления.
С помощью ультразвукового программного обеспечения отрегулируйте параметры для получения глубины изображения 30 дБ до 9,0 мм и ширины до 8,08 миллиметра. Затем добавьте каплю электрогеля к каждой из четырех электрокардиограмм или электродов ЭКГ на сцене и приклейте к ним конечности мыши. Нанесите теплый ультразвуковой гель на живот мыши и опустите передатчик, чтобы привести его в контакт с животом.
Определите аорту как круговой, быстро пульсирующий сосуд. Найдите левую почечную артерию и осмотрите область вручную до 12 миллиметров, чтобы убедиться в отсутствии помех в интересующей области. Возврат в левую почечную артерию.
Затем установите зонд на шесть миллиметров краниально от артерии. Для получения 3D-ультразвука установите дыхательную решетку на 25% задержку и окно 50%, а триггер ЭКГ на 50 миллисекунд. Из 3D опций установите расстояние сканирования на 11,96 миллиметра с размером шага 0,076 миллиметра.
После получения 157 кадров прокрутите его, чтобы проверить качество изображения перед сохранением изображения. Для получения 2D-диаметра отключите дыхательный затвор и триггер ЭКГ и вручную найдите область с наибольшим диаметром в 12-миллиметровом отрезке суперпочечной аорты. Нажмите режим B на экране и получите изображение в режиме B.
Кроме того, для изображения EKV без перемещения преобразователя получите изображение EKV со стандартными настройками системы на том же месте. Развитие и прогрессирование надпочечниковых аневризм контролировали с помощью ультразвука на исходном восьмом и 27-м днях. Трихромное пятно 27 дня аорты иллюстрирует морфологию образовавшейся аневризмы с рассечением стенки и интрамуральным тромбом.
Частота возникновения аневризмы брюшной аорты или ААА на восьмой день и разрывов аорты в течение первых девяти дней показала, что у 9% мышей не удалось сформировать ААА. Тем не менее, 35% мышей испытывали разрывы аорты до имплантации катетера, в результате чего в общей сложности 56% оставшихся мышей с установленным заболеванием ААА были минимальными для расслоения на группы лечения. Наблюдалась обратная зависимость между начальным расширением и дальнейшим прогрессированием заболевания первоначально быстро формирующимися и умеренно растущими аневризмами у мышей, получавших контроль PBS.
Примерные результаты ультразвука показали, что лечение GSK 4 84 ингибировало прогрессирование ААА, в то время как аневризмы продолжали увеличиваться и контролировать мышей. Проходимость катетера имеет важное значение, поскольку отключение катетера от вены или кнопки доступа к сосудам приводит к доставке препарата в подкожное пространство с неизвестными концентрациями препарата в месте аневризмы. Когда мышей приносят в жертву в конце эксперимента, вода и другие ткани могут быть гистологически исследованы, а анализ крови проведен для характеристики эффектов целевого препарата и вне его.
