Наблюдение за фотоповедением в Chlamydomonas reinhardtii

Ключевой вопрос, который решает этот метод, заключается в том, сохраняет ли штамм интересных Chlamydomonas способность к поведению фотографий или нет. Этот метод прост, быстр и легко проверяется, если штамм интересных демонстрирует поведение фотографии. Этот метод может способствовать фотобиологии и клеточной биологии цилиарной моторики.

Продемонстрировать процедуру будет Ацуко Ису, лаборант из моей лаборатории. Для начала добавьте два-три миллилитра клеточной суспензии в 3,5-сантиметровую чашку Петри и поместите чашку на световой короб. Аккуратно встряхните блюдо, равномерно распределите ячейки и приобретите рисунок перед освещением.

Осветите блюдо с одной стороны зеленым светодиодом или светодиодом в настольной темной комнате. Оставьте блюдо примерно на пять минут, прежде чем получить изображения. Для анализа фототаксиса с использованием капель клеточной культуры поместите 25 микролитров капель клеточной суспензии непосредственно на белую пластиковую пластину с помощью микропипетки.

Осветите капли с одной стороны зеленым светодиодом в настольной темной комнате и оставьте их на три минуты, прежде чем получить изображения. Поместите 30 микролитров клеточной суспензии на стеклянную горку и поместите крышку размером 18 на 18 миллиметров с проставками сбоку. Освещайте образцы с одной стороны крышки без распорки зеленым светодиодом и наблюдайте за клетками под микроскопом темного поля с объективом 10X под тусклым красным светом.

После светового освещения записывайте освещенность ячейки в течение 20 секунд с помощью микроскопа, оснащенного камерой. Для анализа реакции фотошока поместите 30 микролитров клеточной суспензии на стеклянный слайд и поместите крышку с проставками поверх слайда. Наблюдайте за клеткой под микроскопом тусклым красным светом.

Применяйте вспышку с помощью вспышки камеры во время записи движения ячейки. Здесь показан репрезентативный пример негативного фототаксиса у Chlamydomonas reinhardtii после пяти минут бокового освещения. Большая часть клеток скапливается на противоположной стороне источника света.

В анализе реакции фотошока почти все клетки демонстрировали реакцию фотошока. Клетки плавали назад в течение короткого периода и восстанавливались вперед, плавая. Для выполнения этой процедуры используйте клетки аридимигудолфазы и подвергайте их воздействию красного света перед анализом.

Если не подвергаться воздействию красного света, клетки станут нечувствительными к свету. Этот метод изолирует различных мутантов с аномальным фототаксисом реакций фотошока. Кроме того, были выявлены различные внутриклеточные и внеклеточные факторы, влияющие на фотоповедение.