Этот протокол представляет собой многоуровневый метод, как для обнаружения EST, так и для фаговой фигуры. Кроме того, был введен большой индекс сохранений для сравнения уровней ЭМИ различных технологий управления. Этот экономичный метод является интеллектуальным, высокопроизводительным и многофункциональным.
Это позволило создать VAMS, сеть ветеринарного мониторинга, которая собрала 20 000 эпидемических генов и аналитических фагов. Этот метод также может быть использован для мониторинга и контроля патогенных бактерий в медицине, сельском хозяйстве, сердцебиении животных и рыболовстве. Этот протокол и этот документ компании должны быть предоставлены.
Мы с техническим обучением гида. Следование ему поможет любому овладеть техникой за короткий промежуток времени. Начните с инкубации микроорганизма контроля качества E.coli и 93 тестовых штаммов сальмонеллы на агаровых планшетах Мюллера-Хинтона.
Далее подготовленный посевной материал каждого штамма разбавляют в 10 раз. Перелейте 200 микролитров стерильного физиологического раствора в лунку А-1 96-луночного планшета в качестве отрицательного контроля. Затем пипетку двух суспензий E.coli в лунки А-2 и А-3 в качестве положительного и контроля качества соответственно.
К остальным 93 лункам добавляют 200 микролитров разбавленного исследуемого штамма. Для приготовления антимикробного агара используются пластины. Во-первых, установите диапазоны концентраций для различных тестируемых антибактериальных агентов в соответствии с индексом LAR.
Выполните логарифмическую схему удвоения раствора антибиотика в соответствии со стандартным методом разведения агара CLSI. Теперь добавьте два миллилитра антимикробного раствора в стерилизованную стеклянную бутылку, содержащую 18 миллилитров расплавленной агаровой среды Мюллера-Хинтона. После тщательного перемешивания разлейте по тарелкам внутри шкафа биологической безопасности.
Дайте агару застыть при комнатной температуре. Обязательно оставьте зазор под крышкой пластин, чтобы поверхность агара высохла. На нижней стороне инкубированных планшетов наметьте типы противомикробных агентов и их соответствующие концентрации.
Расположите несколько инкубационных планшетов для каждого противомикробного агента в стопку, расположенную в логарифмическом порядке удвоения разведения. Наконец, подготовьте две безлекарственные пластины с агаром, которые будут использоваться в качестве контроля для каждого агента. Установите стерилизованную контактную пластину для инокуляции на опору 96-точечного матричного инокулятора в шкафу биологической безопасности.
Далее подготовленный семенной блок с тестируемыми штаммами и агаровой инкубационной пластиной располагают на подвижном носителе. Надавите на передвижной держатель до тех пор, пока семенной блок не окажется ниже пластины инокуляционного штифта. Теперь нажмите на рукоятку управления и опустите пластину инокуляционного штифта, направив штифты 96 по направлению к инокулюму в 96 лунках семенного блока.
Отпустите рукоятку управления контролируемым образом и автоматически сбросьте пластину штифта для прививки, чтобы хорошо перемешать каждый инокулят и окунуть, нажмите на рукоятку управления два-три раза. После этого сдвиньте и расположите несущую пластину так, чтобы инкубационная пластина находилась под пластиной для инокуляции. Нажмите на рукоятку управления, опустив пластину с инокуляционным штифтом и оставив ее на одну-две секунды, чтобы обеспечить полный контакт с поверхностью инкубируемой пластины.
Отпустите рукоятку управления, чтобы завершить один цикл прививки. Замените инкубированную пластину и повторяйте процесс до тех пор, пока не будет завершена партия пластин с антимикробным агаром. Переключитесь на новую пластину инокуляционного штифта и семенной блок, чтобы инокулировать еще одну группу тестируемых штаммов.
Инкубируйте засеянные антимикробные агаровые пластины при комнатной температуре до тех пор, пока влага из пятен посева полностью не впитается в агар. После инкубации переверните пластины и продолжайте инкубацию, чтобы дать возможность неингибированным бактериям образовать колонии. Для получения изображений и статистики данных начните с нажатия на 96-точечную матричную систему получения изображений AST для запуска программы.
На панели задач выберите тестовую информацию. Нажмите кнопку Создать, чтобы создать новое тестовое задание и заполнить необходимые данные. Затем нажмите кнопку сбора данных, а затем фотографию и тестовый элемент, чтобы выбрать только что созданную задачу.
Выберите антибиотики, чтобы выбрать название антибиотика, и градиент, чтобы выбрать начальную концентрацию антибиотика. Наконец, нажмите «Подключиться», чтобы установить соединение с конвертером для получения изображений. Затем поместите инкубированные планшеты на основание планшета обнаружения и вставьте их в конвертер для получения изображений.
Нажмите на коллекцию, чтобы сделать снимки пластин. Нажмите антибиотики и выберите следующий набор пластин. Выберите градиент, чтобы определить начальный градиент, затем перейдите к следующему этапу сбора изображений.
Завершите процедуру, нажав кнопку «Отправить», чтобы определить образование колоний и преобразовать изображения в минимальные ингибирующие концентрации, то есть значения MIC. Нажмите на запрос, чтобы получить доступ ко всем результатам MIC. Начните с использования метода двухслойного агара для получения различных фагов.
Разбавьте фаги до подходящей параллельной концентрации и добавьте 200 микролитров фагового посевного материала в 96-луночный затравочный блок. Далее подготовьте двухслойную инкубационную пластину для каждого исследуемого штамма. Оставьте зазор под крышкой двухслойной пластины, чтобы дать возможность высохнуть.
Подготовленный фаговый затравочный блок и двухслойную пластину поместить на мобильный носитель 96-точечного матричного инокулятора. Перенесите весь фаговый инокуляр на поверхность полуагара. Оставьте пластины при комнатной температуре до тех пор, пока вся инокулярная влага не впитается в полуагар.
Теперь инкубируйте планшеты при температуре 37 градусов Цельсия для испытуемых штаммов в течение четырех-шести часов. Используйте конвертер получения изображений для получения и сохранения изображения экспериментального результата каждой двухслойной пластины. Запишите количество и морфологию пятен различной формы в электронную таблицу на основе полученных изображений и рассчитайте соответствующие пропорции различных типов фагов.
Морфологическое исследование роста сальмонелл на планшетах с ампициллином показало, что отрицательный контроль в А-1 не показал роста. МПК штамма сальмонеллы в А-4 составил 64 микрограмма на миллилитр, а А-5 — 16 микрограммов на миллилитр. Значения процентной резистентности ампициллина, ципрофлоксацина и амоксициллина-клавулановой кислоты были выше 50%, в то время как значения доксициклина, флорфениколя, цефотаксима и энрофлоксацина составляли от 30% до 50%Гентамицин, амикацин и меропенем показали процентные значения резистентности менее 30%Показатели ЛАР ципрофлоксацина и амоксициллина-клавулановой кислоты значительно снизились.
Морфологический анализ роста сальмонелл на двухслойных пластинах показал, что наблюдаются четыре основные пятнистые морфологии фагов. Круглое прозрачное литическое пятно принадлежало фагу, который мог надежно убить хозяина на пластине, но который мог или не мог успешно размножаться за счет этого хозяина. Коллекцию мемориальных досок составляли настоящие таблички.
Мутное литическое пятно возникло из-за фага, который не убил хозяина на пластине, и который может или не может успешно размножаться за счет этого хозяина. Отсутствие литического пятна указывало на нелитическую природу. Этот метод легко и эффективно переносит 96 агаровых линз за один раз, и приборы автоматически распознают изображения, а затем вычисляют линейные кубики.
Ожидается, что эта технология будет способствовать исследованиям и индустриализации фагов, а применение фагов является одним из удивительных способов уменьшить и решить проблему УПП.
