RMN Spectroscopie comme outil robuste pour l'évaluation rapide du profil des suppléments Lipid huile de poisson

Résumé

Ici, à haute résolution du ¹ H et ¹³ C spectroscopie de résonance magnétique nucléaire (RMN) a été utilisé comme outil rapide et fiable pour l' analyse quantitative et qualitative des suppléments d'huile de poisson encapsulées.

Résumé

Le régime alimentaire occidental est pauvre en n -3 acides gras, donc la consommation de suppléments d'huile de poisson est recommandé d'augmenter l'apport de ces nutriments essentiels. L'objectif de cette étude est de démontrer l'analyse qualitative et quantitative des suppléments d'huile de poisson encapsulées en utilisant ^une haute résolution H et spectroscopie RMN ¹³ C en utilisant deux instruments différents de RMN; 500 MHz et un instrument de 850 MHz. Les deux protons ⁽¹ H) et du carbone ⁽¹³ C) Les spectres de RMN peuvent être utilisées pour la détermination quantitative des constituants majeurs des suppléments d'huile de poisson. Quantification des lipides dans les suppléments d'huile de poisson est atteint grâce à l'intégration des signaux de RMN appropriés dans les spectres 1D pertinents. Les résultats obtenus par ¹ H et ¹³ C - RMN sont en accord avec l'autre, malgré la différence de résolution et de sensibilité entre les deux noyaux et les deux instruments. ¹ H RMN offreSA analyse plus rapide par rapport à ¹³ C - RMN, comme le spectre peut être enregistré en moins de 1 min, par opposition à l' analyse ¹³ C - RMN, qui dure de 10 minutes à une heure. Le ¹³ spectre de RMN C, cependant, est beaucoup plus informative. Il peut fournir des données quantitatives pour un plus grand nombre d'acides gras individuels et peut être utilisé pour déterminer la distribution de position des acides gras sur le squelette glycerol. Les deux noyaux peuvent fournir des informations quantitatives en une seule expérience sans la nécessité d'étapes de purification ou de séparation. La force du champ magnétique affecte principalement les ¹ H spectres RMN en raison de sa résolution inférieure par rapport à ¹³ C RMN, cependant, même les instruments de RMN à plus faible coût peuvent être efficacement appliquées en tant que méthode standard par les laboratoires de l' industrie alimentaire et de contrôle de la qualité.

Introduction

La consommation de n -3 acides gras dans le régime alimentaire est avérée être bénéfique contre plusieurs maladies telles que des troubles cardiaques ^{1, 2, 3, 4} maladies inflammatoires et le diabète ^5. Le régime alimentaire occidental est considéré comme pauvre en n -3 acides gras et donc la consommation de suppléments d'huile de poisson est recommandé d'améliorer la n -6 / -3 n équilibre dans la nutrition des consommateurs ^1. Malgré la récente augmentation de la consommation de suppléments d'huile de poisson, des questions demeurent sur la sécurité, l'authenticité et la qualité de certains de ces produits. L'analyse de la composition rapide et précise des suppléments d'huile de poisson est essentiel d'évaluer correctement la qualité de ces produits commerciaux et d'assurer la sécurité des consommateurs.

Les méthodes les plus communes pour l'évaluation du supplément d'huile de poissons sont chromatographie en phase gazeuse (GC) et la spectroscopie infrarouge (IR). Bien que ces méthodes sont très sensibles, ils souffrent de plusieurs inconvénients ^6. L' analyse GC prend beaucoup de temps (4-8 h) parce que la séparation et la dérivatisation des composés individuels est requis ⁷ et l' oxydation des lipides peuvent se produire lors de l'analyse ^{8, 9.} Bien que la spectroscopie IR peut être quantitative, un modèle de prédiction doit être construit en utilisant la régression des moindres carrés partiels (PLSR), bien qu'il y ait des exceptions dans lesquelles bandes IR peut être attribué à un seul composé ^10. PLSR nécessite l'analyse d'un grand nombre d'échantillons, ce qui augmente le temps de l'analyse ^11. Pour cette raison, il y a un intérêt croissant pour le développement de nouvelles méthodes d'analyse qui permettent une analyse précise et rapide d'un grand nombre d'échantillons d'huile de poisson. Des organisations telles que l'OffiCE des compléments alimentaires (ODS) aux National Institutes of Health (NIH) et la Food and Drug Administration (FDA) ont collaboré avec l'Association of Official Analytical Chemists (AOAC) pour développer ces nouvelles méthodes ^{12, 13.}

L' une des méthodes d' analyse les plus prometteurs pour le dépistage et l'évaluation des matrices à plusieurs composants, tels que les suppléments alimentaires, est la spectroscopie par résonance magnétique (RMN) nucléaire ^{14, 15.} spectroscopie RMN présente plusieurs avantages: il est une technique non destructive et quantitative, il faut un minimum d'aucune préparation de l'échantillon, et il se caractérise par une excellente précision et la reproductibilité. En outre, la spectroscopie RMN est une méthode respectueuse de l'environnement car il utilise seulement de petites quantités de solvants. Le principal inconvénient de la spectroscopie de RMN est sa sensibilité relativement faible par rapport à d'autres analytiméthodes cal Cependant, les progrès technologiques récents dans l'instrumentation tels que des champs magnétiques forts, des sondes cryogéniques de différents diamètres, le traitement de données de pointe et polyvalents séquences d'impulsions et de techniques ont augmenté la sensibilité jusqu'à la plage des nM. Bien que l'instrumentation RMN est le coût élevé, la longue durée de spectromètres RMN et les nombreuses applications de RMN réduisent le coût de l'analyse à long terme. Ce protocole vidéo détaillé est destiné à aider les nouveaux praticiens dans le domaine éviter les pièges associés à ¹ H et ¹³ C RMN analyse spectroscopique des suppléments d'huile de poisson.

Protocole

1. Préparation de l'échantillon RMN

Note: Attention, s'il vous plaît consulter toutes les fiches de sécurité des matières pertinentes (FS) avant utilisation. Chloroforme deutéré _(CDCI3) utilisé dans la préparation de l' échantillon est toxique. S'il vous plaît utiliser toutes les pratiques de sécurité appropriées lors de l'exécution de préparation d'échantillon comprenant l'utilisation d'une hotte et de l'équipement de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse, pantalon pleine longueur, à bout fermé chaussures).

1. Préparation de ¹ H et ¹³ échantillons C
   1. Extraire 120 ul (~ 110 mg) d'huile de poisson à partir d'une capsule diététique en utilisant une seringue et le placer dans un flacon en verre de 4 ml. Noter le poids de l'huile de poisson.
   2. dissolution de l'échantillon
      1. Dissoudre environ 120 ul d'huile de poisson dans 500 ul de CDCl ₃ contenant 0,01% de tétraméthylsilane (TMS) utilisé comme référence pour la ¹ H et ¹³ déplacements chimiques C.
         REMARQUE: TMS est utiliséD uniquement pour le calibrage de décalage chimique (voir les numéros d'étape 2.2.1.2.7 et 2.2.2.2.7), pas de quantification (voir numéros d'étape 2.2.1.3 et 2.2.2.3) fins.
      2. Préparer un 2,6-di- tert - butyl-4-méthylphénol (BHT) solution mère, si quantification exprimée en mg / g est souhaitée, en dissolvant environ 220 mg de BHT et 15 mg de chrome (III) acétylacétonate (Cr ( acac) ₃₎ dans 20 ml de CDCl ₃ contenant 0,01% de TMS. Utiliser 500 ul de la solution mère pour dissoudre 100 mg (± 10 mg) d'huile de poisson.
   3. Après dissolution de l'huile (cela prend quelques secondes), transférer la totalité de la solution directement dans un tube de RMN de haute qualité à 5 mm et fixer un capuchon. Analyser les échantillons dans les 24 heures après la préparation des échantillons.

2. Préparation de l'instrument RMN

Note: Attention, méfiez-vous que la présence de champs magnétiques puissants produits par les instruments de RMN peut affecter les dispositifs médicaux et implfourmis , tels que les stimulateurs cardiaques et prothèses chirurgicales, ainsi que des articles électroniques tels que les cartes de crédit, montres, etc. prudence supplémentaire est nécessaire lorsque l'analyse est effectuée en utilisant des aimants non-blindage. Deux instruments de RMN ont été utilisés pour l'acquisition de ¹ H et ¹³ C Les spectres de RMN; un spectromètre fonctionnant à 850,23 MHz et 213,81 MHz pour ¹ H et ¹³ noyaux de C, respectivement, équipé d'un inverse refroidi à l'hélium-résonance triple (TCI) sonde de 5 mm et un spectromètre fonctionnant à 500,20 MHz et 125,77 MHz pour ¹ H et ¹³ C noyaux, respectivement, muni d'une large bande observée (BBO) refroidi à l'azote sonde de 5 mm. Toutes les expériences ont été effectuées à 25 ± 0,1 ° C et les spectres ont été traités par un ensemble standard logiciel d'acquisition et de traitement d'analyse des données de RMN (voir Matériaux List).

1. Préparation pour l' acquisition des spectres RMN
   Note: ¹ H et RMN ¹³ C Les spectrespeut être acquise par conséquent sans retirer l'échantillon de l'instrument.
   1. Insérer le tube de RMN dans une turbine de filage (voir Matériaux List).
   2. Placer la centrifugeuse et le tube sur le sommet d'une jauge de profondeur graduée et pousser doucement la partie supérieure du tube jusqu'à ce que sa partie inférieure touche le fond de la jauge.
   3. Placer l'échantillon RMN dans un endroit ouvert du SampleCase. Notez le numéro de fente est placé dans l'échantillon.
   4. Pour charger l'échantillon dans la RMN, le retour à l'ordinateur de commande et tapez « sx # », où # est la fente du SampleCase tenant votre échantillon.
   5. Attendre que le signal du deuterium de CDCl ₃ à apparaître sur l'écran de la fenêtre de verrouillage. Si elle ne semble pas automatiquement, tapez « lockdisp ». Dès que le signal du deuterium est visible, de type « lock » sur la ligne de commande et sélectionner dans la liste du solvant « CDCl ₃ » afin de verrouiller l'échantillon en utilisant la résonance du deuterium CDCl _3.
      NOTE: Deutérium signal peut ne pas apparaître si l'utilisateur précédent a utilisé un solvant différent. L'utilisateur doit attendre l'indicateur que l'échantillon est vers le bas, puis verrouiller.
   6. Tapez « bsmsdisp » dans la ligne de commande pour assurer la filature n'est pas actif. Si le bouton « SPIN » est vert, cliquez dessus pour désactiver la filature.
   7. Tapez la commande « nouveau » pour créer un nouvel ensemble de données. Entrez un nom pour l'ensemble de données dans l'onglet « NOM » et le numéro d'expérience dans l'onglet « EXPNO ». Utilisez le numéro « 1 » dans l'onglet « PROCNO ». Dans l'onglet « Expérience », cliquez sur « Sélectionner » et choisissez le fichier de paramètres « PROTON ». Ecrire le titre de l'expérience dans l'onglet « TITLE ». Cliquez sur "OK".
   8. Type « getprosol » dans la ligne de commande pour obtenir les paramètres standard pour la sonde à courants de RMN et de solvant.
   9. Répétez l' étape 2.1.7 pour ¹³ C, en sélectionnant la séquence d'impulsions « C13IG » dans l'onglet « Expérience » pour le 1D ¹³ C inverse gexpérience découplé ATED.
   10. Type « getprosol » dans la ligne de commande pour obtenir les paramètres standard pour la sonde à courants de RMN et de solvant.
   11. Tapez la commande « atma » pour effectuer le réglage automatique et l'appariement de la sonde pour les deux noyaux de carbone et de protons.
   12. Effectuer gradient à une dimension de calage pour obtenir un champ magnétique très homogène, et donc la forme de la ligne optimale pour les signaux de RMN.
       1. Utiliser la procédure automatique standard pour 1D calage, simplement en exécutant séquentiellement les commandes « qu topshim 1dfast ss », « qu topshim ss tuneb » et « rapport topshim qu » sur la ligne de commande.
2. Optimisation des paramètres
   1. 90 ° calibrage d'impulsions
      1. Créer un nouvel ensemble de données pour ¹ H (voir les étapes 2.1.7 et 2.1.8).
      2. Tapez la commande « paropt » sur la ligne de commande pour démarrer le programme d'automatisation pour l'étalonnage du 90 ° pulelle-même. Sélectionner la durée d'impulsion, p1, comme paramètre à modifier.
      3. Commençons par « 2 » ps que la valeur initiale de p1, entrez « 2 » uS incréments et réaliser des expériences « 16 ».
      4. Créer un nouveau jeu de données pour ¹³ C (voir étape 2.1.9) et répéter le processus pour les ¹³ noyaux de C (voir les étapes 2.2.1.2 et 2.2.1.3).
   2. T ₁ mesure mesuré par la méthode de null ¹⁶ pour ¹ H
      REMARQUE: La méthode null utilise la séquence d'impulsions d'inversion - récupération, constituée d'une suite d'impulsions à 180 ° par un retard (tau), pour permettre la détente le long de l'axe z et une impulsion à 90 ° finale qui crée l'aimantation transversale observable.
      1. Créer un nouvel ensemble de données pour ¹ H (voir les étapes 2.1.7 et 2.1.8).
      2. Tapez « pulprog t1ir1d » pour changer la séquence d'impulsions à l'expérience inversion-récupération.
      3. Tapez les commandes suivantes sur le commanligne d configurer la largeur spectrale en ppm, le centre de l'émetteur RF, le nombre de balayages le nombre de balayages factices et le nombre de points de données « sw 8 », « O1P 3,8 », « ns 2 », « ds 2" et "td 64K".
      4. Type « p1 (valeur) » et entrer les valeurs de durée de 90 ° impulsion telle que déterminée par l'étalonnage de l'impulsion (voir étape 2.2.1) et de type « p2 (valeur) » pour l'impulsion de 180 ° (la valeur de durée pour les 180 ° impulsion est la durée d'impulsion de 90 ° multiplié par deux).
      5. Réglez le retard de recyclage à une valeur très grande, par exemple 10 s en tapant « d1 10 ».
      6. Set tau à un court - valeur, par exemple 10 ms, en tapant « d7 10ms » dans la ligne de commande.
      7. Régler le gain du récepteur (RG) à une valeur appropriée en utilisant la commande « RGA » pour le calcul automatique de RG.
      8. Exécuter un spectre en tapant la commande « ZG ».
      9. Exécuter Fourier transformation en tapant « efp »dans la ligne de commande.
      10. Effectuer une correction automatique de phase en tapant la commande « APK » dans la ligne de commande. Si des ajustements de phase supplémentaires sont nécessaires pour améliorer encore le spectre, cliquez sur l'onglet « Processus », puis cliquez sur l'icône « Ajuster la phase » pour entrer dans le mode de correction de phase.
          1. Utiliser le ordre zéro (0) et du premier ordre (1) des icônes de correction de phase en faisant glisser la souris jusqu'à ce que tous les signaux sont en mode d'absorption négative. Appliquer et enregistrer les valeurs de correction de phase en cliquant sur le bouton « Retour et Enregistrer » pour quitter le mode de correction de phase.
      11. Augmenter le tau jusqu'à ce que tous les pics sont positifs ou nulled en répétant les étapes 2.2.2.6-2.2.2.9. Pour déterminer la valeur T _1, il suffit de diviser la valeur de tau , où le pic est nulled avec LN2.
   3. T ₁ mesure mesuré par la méthode de ¹⁶ à ¹³ null C
      1. Créer un nouveau jeu de données pour ¹³ C (voir étape 2.1.9)
      2. Type « pulprog t1irpg » pour changer la séquence d'impulsions à l'expérience inversion-récupération pour les noyaux de carbone.
      3. Tapez les commandes suivantes sur la ligne de commande pour établir la largeur spectrale en ppm, le centre de l'émetteur RF, le nombre de balayages, le nombre de balayages factices et le nombre de points de données: « sw 200 », « O1P 98 » , "ns 8", "ds 2" et "td 64K".
      4. Type « p1 (valeur) » et entrer les valeurs de durée de 90 ° impulsion telle que déterminée par l'étalonnage de l'impulsion (voir étape 2.2.1) et de type « p2 (valeur) » pour l'impulsion à 180 ° (la valeur de durée est le 90 ° durée de l'impulsion multipliée par deux).
      5. Définissez le délai de recyclage à une valeur très importante, comme 100 s en tapant « d1 100 ».
      6. Set tau à un court - valeur, par exemple 100 ms en tapant « d7 100ms » dans la ligne de commande.
      7. Réglez le Fichgain er (RG) à une valeur appropriée en utilisant la commande « RGA » pour le calcul automatique de RG.
      8. Exécuter un spectre en tapant la commande « ZG ».
      9. Exécuter Fourier transformation en tapant « PEF » dans la ligne de commande.
      10. Effectuer une correction de phase automatique en tapant la commande « APK » dans la ligne de commande. Si des ajustements de phase supplémentaires sont nécessaires pour améliorer encore le spectre, cliquez sur l'icône et les icônes de correction de phase pour l'ordre zéro « Ajuster la phase » (0) et la phase de premier ordre (1) correction.
          1. En cliquant sur les icônes de correction de phase d'ordre zéro et de premier ordre, faites glisser la souris jusqu'à ce que tous les signaux sont en mode d'absorption négatif. Appliquer et enregistrer les valeurs de correction de phase en cliquant sur le bouton « Retour et Enregistrer » pour quitter le mode de correction de phase.
      11. Augmenter le tau jusqu'à ce que tous les pics sont positifs ou nulled en répétant les étapes 2.2.3.6-2.2.3.9. Déterminerla valeur T _1, il suffit de diviser la valeur de tau , où le pic est nulled avec LN2.
3. Une dimension (1D) RMN Spectra
   1. ¹ Les spectres ' H-RMN
      1. Acquisition des données RMN
         1. Aller à la ¹ jeu de données de H créé à l' étape 2.1.7 et en utilisant le « impulsion-acquisition » standard séquence d'impulsions, « zg », en tapant « pulprog zg » dans la ligne de commande.
         2. Tapez les commandes suivantes sur la ligne de commande pour établir la largeur spectrale en ppm, le centre de l'émetteur RF, le nombre de balayages, le nombre de balayages factices, le nombre de points de données et la durée d'impulsion pour un angle d'impulsion de 90 ° : "sw 8", "O1P 3,8", "ns 2", "ds 2", "td 64K" et "p1 (tel que déterminé par l' étalonnage d'impulsion)" (voir étape 2.2.1).
            REMARQUE: Les points de données 32K peuvent être utilisés pour l'instrument 500 MHz.
         3. Définir un délai de relaxation de 7 s pour l'instrument de 500 MHz ou 9 s pour l'instrument de 850 MHz en tapant "d1" ou "7s d1 9s", respectivement, dans la ligne de commande.
         4. Régler le gain du récepteur (RG) à une valeur appropriée en utilisant la commande « RGA » pour le calcul automatique de RG.
         5. Tapez « baseopt digmod » pour acquérir un spectre de référence amélioré.
         6. Démarrez l'acquisition en tapant la commande-acquire d'impulsion « ZG » dans la ligne de commande.
      2. Le traitement des données RMN
         1. Tapez « si 64K » dans la ligne de commande pour appliquer zéro remplissage et définir la taille du spectre réel à 64K.
         2. Régler le paramètre élargissant la ligne de 0,3 Hz en tapant « lb 0,3 » dans la ligne de commande pour appliquer une fonction de pondération (décroissance exponentielle) avec un facteur élargissement de ligne de 0,3 Hz avant la transformation de Fourier.
         3. Exécuter Fourier transformation en tapant « PEF » dans la commandeligne.
         4. Effectuer une correction de phase automatique en tapant la commande « APK » dans la ligne de commande. Si des ajustements de phase supplémentaires sont nécessaires pour améliorer encore le spectre, cliquez sur l'onglet « Processus », puis cliquez sur l'icône et les icônes de correction de phase pour l'ordre zéro « Ajuster la phase » (0) et de premier ordre (1) correction de phase .
            1. En cliquant sur les icônes de correction de phase d'ordre zéro et de premier ordre, faites glisser la souris jusqu'à ce que tous les signaux sont en mode d'absorption positive. Appliquer et enregistrer les valeurs de correction de phase en cliquant sur le bouton « Retour et Enregistrer » pour quitter le mode de correction de phase.
         5. Appliquer une fonction polynôme du quatrième ordre pour la correction de ligne de base lors de l'intégration en saisissant la commande « abs n ».
            NOTE: Ceci assure une base spectrale plat avec une intensité minimale.
         6. Déplacements chimiques en ppm Rapport de TMS (δ = 0). Cliquez sur l'étalonnage ( "Calib. Axest ") icône, et placer le curseur sur la ligne rouge au-dessus du signal TMS RMN (pic le plus proche de 0). clic gauche et saisir « 0 ».
      3. L' analyse des données de RMN
         1. Intégrer la région spectrale de δ 1,1 à ô 0,6, ainsi que les pics à δ 4,98, δ 5,05 et δ 5,81 avec l'icône « Intégrer » (sous l'onglet « process ») et le point culminant ( « Définir une nouvelle région ») icône. cliquez et tirez vers la gauche à travers les Intégrales.
            REMARQUE: S'il est nécessaire de se concentrer sur une région, cliquez sur l'icône en surbrillance pour désactiver et le clic gauche et faites glisser la souris pour zoomer sur la région. Pour régler l'intensité de seuil, utilisez le bouton central de la souris si nécessaire. Cliquez sur l'icône en surbrillance à nouveau pour rendre la fonction d'intégration active, puis passer à la pointe suivante.
            1. Normaliser la somme des intégrales ci-dessus à 100 en cliquant droit sur la valeur intégrale qui apparaissents sous le signal et sélectionnez « Normaliser somme de Intégrales ». Entrez la valeur « 100 » dans la boîte et cliquez sur le « Retour et Enregistrer » pour quitter le mode d'intégration.
         2. Lors de l' utilisation du BHT comme étalon interne, l' intégration du pic à δ 6,98 et définir l'intégrale correspondant aux millimoles de BHT par 0,5 ml de la solution mère.
         3. Intégrer les pics d'intérêt (voir l'étape 2.3.1.3.1) se prolongeant à partir de 10 Hz de chaque côté de la pointe, lorsque cela est possible.
         4. Procéder pour effectuer ¹³ des spectres RMN C-acquisition et de traitement d'une manière similaire.
   2. ¹³ Les spectres RMN C
      1. Acquisition des données RMN
         1. Aller à la ¹³ C ensemble de données et en utilisant la séquence d'impulsions découplée fermée inverse, « zgig » en tapant « pulprog zgig » dans la ligne de commande.
            REMARQUE: Pour exécuter une expérience de carbone avec la norme Decou à large bandePLED séquence d'impulsions, dans la ligne de commande de type « pulprog zgpg ».
         2. Tapez les commandes suivantes sur la ligne de commande pour établir la largeur spectrale en ppm, le centre de l'émetteur RF, le nombre de balayages, le nombre de balayages factices, le nombre de points de données et la durée d'impulsion pour un angle d'impulsion de 90 ° : "sw 200", "O1P 95", "16 ns" "ds 2", "td 64K" et "p1 (tel que déterminé par l'étalonnage d'impulsion)" (voir l'étape 2.2.1.4).
         3. Définir un délai de relaxation de 35 s pour l'instrument de 500 MHz ou de 45 s pour l'instrument de 850 MHz en tapant "d1" ou "35s 45s" d1, respectivement, dans la ligne de commande. Lorsque vous utilisez le BHT, le retard de relaxation devrait être de 50 s dans l'instrument 500 MHz et 60 s dans l'instrument 850 MHz.
         4. Régler le gain du récepteur (RG) à une valeur appropriée en utilisant la commande « RGA » pour le calcul automatique de RG.
         5. Tapez « baseopt digmod » dans la ligne de commande pour acquérir un spectre wième ligne de base améliorée.
         6. Démarrez l'acquisition en tapant la commande-acquire d'impulsion « ZG » dans la ligne de commande.
      2. Le traitement des données RMN
         1. Tapez « si 64K » dans la ligne de commande pour appliquer zéro remplissage et définir la taille du spectre réel à 64K.
         2. Régler le paramètre élargissant la ligne de 1,0 Hz en tapant « lb 1,0 » dans la ligne de commande pour appliquer une fonction de pondération (décroissance exponentielle) avec un facteur élargissement de ligne de 1,0 Hz avant la transformation de Fourier.
         3. Exécuter Fourier transformation en tapant « PEF » dans la ligne de commande.
         4. Effectuer une correction de phase automatique en tapant la commande « APK » dans la ligne de commande. Si des ajustements de phase supplémentaires sont nécessaires pour améliorer encore le spectre, cliquez sur l'onglet « Processus », puis cliquez sur l'icône « Ajuster la phase » et les icônes de correction de phase pour l'ordre zéro (0) et la phase de premier ordre (1) correction .
            1. En cliquant sur les icônes d'ordre zéro et de correction de phase de premier ordre, faites glisser la souris jusqu'à ce que tous les signaux sont en mode d'absorption positive. Appliquer et enregistrer les valeurs de correction de phase en cliquant sur le bouton « Retour et Enregistrer » pour quitter le mode de correction de phase.
               NOTE: Pour les spectres de carbone enregistrés sur la fréquence de Larmor de 214 MHz (l'instrument 850 MHz) la correction des erreurs dépendant de la fréquence (de premier ordre) peut être difficile et prend du temps pour les utilisateurs moins expérimentés en raison des effets importants hors résonance du impulsion à 90 °.
         5. Appliquer une fonction polynôme du quatrième ordre pour la correction de ligne de base lors de l'intégration en saisissant la commande « n abs » dans la ligne de commande.
         6. Déplacements chimiques en ppm Rapport de TMS (δ = 0). Cliquez sur l'étalonnage ( « Calib. Axe ») icône et placez le curseur avec la ligne rouge sur le dessus du signal RMN à être référencé. Clic gauche et tapez « 0 ».
      3. L' analyse des données de RMN
         1. Intégrer la région spectrale de δ 175 à l' aide de 171 ô l'icône « Intégrer » (sous l'onglet « Processus ») et le point culminant ( « Définir nouvelle région ») icône. cliquez et tirez vers la gauche à travers les Intégrales.
            REMARQUE: S'il est nécessaire de se concentrer sur une région, cliquez sur l'icône en surbrillance pour désactiver et le clic gauche et faites glisser la souris pour zoomer sur la région. Cliquez sur l'icône en surbrillance à nouveau pour rendre la fonction d'intégration active, puis passer à la pointe suivante.
            1. Réglez l'intégrale à 100 en faisant un clic droit sur la valeur intégrale qui apparaît sous le signal et sélectionnez « Calibrer courant intégrale ». Entrez la valeur « 100 » dans la boîte et cliquez sur le « Retour et enregistrer » pour quitter le mode d'intégration.
         2. Lors de l' utilisation du BHT comme étalon interne, l' intégration du pic à δ 151,45 et définir l'intégrale égale àles millimoles de BHT par 0,5 ml de la solution mère.
         3. Intégrer les pics d'intérêt extension 5 Hz de chaque côté du pic (voir étape 2.3.2.3.1).

Résultats

¹ H et ¹³ C Les spectres de RMN ont été recueillies pour des suppléments d'huile de poisson disponibles dans le commerce en utilisant deux instruments de RMN; 850 MHz et un spectromètre de 500 MHz. Ces spectres peuvent être utilisés pour la détermination quantitative de composants d'huile de poisson, comme l'acide docosahexaénoïque (DHA) et l' acide eicosapentaénoïque (EPA), ainsi que d' autres composés tels que n - 1 des cha...

Discussion

Modifications et stratégies de dépannage

Qualité spectrale. La largeur de raie du signal RMN et donc la résolution du spectre RMN est fortement dépendante de calage, qui est un procédé pour l'optimisation de l'homogénéité du champ magnétique. Pour une analyse de routine, 1D est shimming n'est pas nécessaire et suffisante d'une 3D shimming, étant donné qu'il est réalisé par le personnel de RMN sur une base régulière. Si cela est le cas, il f...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Avance III 850 NMR instrument	Bruker
Avance III 500 NMR instrument	Bruker
TCI 5mm probe	Bruker		Helium cooled inverse (proton deetected) NMR probe featuring three independent channels (1H, 13C, 15N)
BBO prodigy 5mm probe	Bruker		Nitrogen cooled observe (X-nuclei detected) probe, featuring two channels; one for 1H and 19F detectionand one for X-nuclei (covering from 15N to 31P)
Spinner turbin	Bruker		NMR spinners are made by polymer materials and they have a rubber o-ring to hold the NMR tube securely in place
Topspin 3.5	Bruker
deuterated chloroform	Sigma-Aldrich	865-49-6	99.8 atom % D, contains 0.03 TMS
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,	Sigma-Aldrich	128-37-0	purity >99%
Fish oil samples
NMR tubes	New Era	NE-RG5-7	5mm OD Routine “R” Series NMR Sample Tube
BSMS	Bruker		Bruker Systems Management System; control system device