Spettroscopia NMR come uno strumento robusto per la rapida valutazione del profilo lipidico di olio di pesce integratori

Riepilogo

Qui, la spettroscopia ad alta risoluzione ¹ H e ¹³ C Risonanza Magnetica Nucleare (NMR) è stato utilizzato come strumento di rapida e affidabile per l'analisi quantitativa e qualitativa dei supplementi di olio di pesce incapsulati.

Abstract

La dieta occidentale è povera di acidi grassi n -3, pertanto si raccomanda il consumo di supplementi di olio di pesce per aumentare l'apporto di questi nutrienti essenziali. L'obiettivo di questo lavoro è quello di dimostrare l'analisi qualitativa e quantitativa di olio di pesce incapsulato utilizzando ad alta risoluzione ¹ H e ¹³ C NMR utilizzando due diversi strumenti NMR; 500 MHz e uno strumento 850 MHz. Sia protone ⁽¹ H) e carbonio ⁽¹³ C) spettri NMR possono essere utilizzati per la determinazione quantitativa dei principali costituenti degli integratori di olio di pesce. Quantificazione dei lipidi negli integratori di olio di pesce è ottenuta attraverso l'integrazione dei segnali NMR appropriate nel relativi spettri 1D. Risultati ottenuti da ¹ H e ¹³ C NMR sono in buon accordo con l'altro, nonostante la differenza di risoluzione e sensibilità tra i due nuclei e due strumenti. Offerta ^1H NMRsa un'analisi più rapida rispetto a ¹³ C NMR, lo spettro può essere registrato in meno di 1 minuto, a differenza di analisi ¹³ C NMR, che dura da 10 minuti a un'ora. Lo spettro NMR ¹³ C, tuttavia, è molto più informativo. Può fornire dati quantitativi per un maggior numero di singoli acidi grassi e può essere utilizzato per determinare la distribuzione posizionale degli acidi grassi sullo scheletro di glicerolo. Entrambi i nuclei possono fornire informazioni quantitative in un esperimento senza la necessità di purificazione o separazione gradini. La forza del campo magnetico colpisce soprattutto l'spettri NMR ¹ H a causa della sua bassa risoluzione rispetto a ¹³ C NMR, tuttavia, strumenti NMR costo ancora più basso possono essere efficacemente applicato come un metodo standard dai laboratori dell'industria alimentare e controllo qualità.

Introduzione

Il consumo di acidi grassi n -3 nella dieta ha dimostrato di essere utile contro diverse condizioni quali disturbi cardiaci ^{1, 2, 3, 4} e malattie infiammatorie diabete ^5. La dieta occidentale è considerato povero di n -3 acidi grassi e quindi si raccomanda il consumo di integratori di olio di pesce per migliorare la n -6 / -3 n equilibrio nella nutrizione del consumatore ^1. Nonostante il recente aumento del consumo di pesce supplemento di olio, le domande rimangono circa la sicurezza, l'autenticità e la qualità di alcuni di questi prodotti. L'analisi rapida ed accurata compositiva di supplementi di olio di pesce è essenziale per valutare correttamente la qualità di questi prodotti commerciali e garantire la sicurezza dei consumatori.

Le metodologie più comuni per la valutazione del supplemento di olio di pesces sono gascromatografia (GC) e la spettroscopia a infrarossi (IR). Mentre questi sono metodi altamente sensibili, soffrono di diversi inconvenienti ^6. Analisi GC richiede molto tempo (4-8 h) per la separazione e derivatizzazione dei singoli composti è richiesto ⁷ e l'ossidazione dei lipidi possono verificarsi durante l'analisi ^{8, 9.} Mentre la spettroscopia IR può essere quantitativa, un modello di previsione è richiesta per essere costruito usando parziale minimi quadrati regressione (PLSR), anche se ci sono eccezioni in cui bande IR possono essere attribuiti ad un singolo composto ^10. PLSR richiede l'analisi di un gran numero di campioni, che aumenta il tempo di analisi ^11. Per questo motivo, v'è un crescente interesse per lo sviluppo di nuove metodologie analitiche che permettono l'analisi precisa e veloce di un gran numero di campioni di olio di pesce. Organizzazioni come l'Office di integratori alimentari (ODS) presso il National Institutes of Health (NIH) e la Food and Drug Administration (FDA) hanno collaborato con l'Associazione dei chimici analitici ufficiali (AOAC) per sviluppare questi nuovi metodi ^{12, 13.}

Uno dei metodi analitici più promettenti per lo screening e la valutazione di matrici a più componenti, come integratori alimentari, è Nucleare spettroscopia a risonanza magnetica (RMN) ^{14, 15.} spettroscopia NMR ha diversi vantaggi: è una tecnica non distruttiva e quantitativa, richiede minima o nessuna preparazione del campione, ed è caratterizzato da un'eccellente precisione e riproducibilità. Inoltre, la spettroscopia NMR è una metodologia ecologico perché utilizza solo piccole quantità di solventi. Lo svantaggio principale della spettroscopia NMR è la sua sensibilità relativamente bassa rispetto ad altri analytiMetodi cal, tuttavia, i recenti progressi tecnologici nella strumentazione quali campi magnetici forti, sonde criogeniche di vari diametri, elaborazione dati avanzata e sequenze di impulsi versatili e tecniche hanno aumentato la sensibilità fino alla gamma nM. Mentre strumentazione NMR è alto costo, la lunga durata di spettrometri NMR e le molte applicazioni di NMR abbassare il costo delle analisi a lungo termine. Questo protocollo video dettagliato ha lo scopo di aiutare i nuovi operatori del settore evitare insidie associati con ¹ H e ¹³ C NMR analisi spettroscopica di supplementi di olio di pesce.

Protocollo

1. Preparazione del campione NMR

Nota: Attenzione, si prega di consultare tutte le schede di sicurezza pertinenti (MSDS) prima dell'uso. Cloroformio deuterato (CDCl ₃₎ utilizzato nella preparazione del campione è tossico. Si prega di utilizzare tutte le pratiche di sicurezza appropriate quando si effettua la preparazione del campione compreso l'uso di una cappa aspirante e dispositivi di protezione individuale (occhiali, guanti, camice, pantaloni lunghe, chiuso-punta scarpe).

1. Preparazione di ¹ H e ¹³ campioni C
   1. Estrarre 120 ml (~ 110 mg) di olio di pesce da una capsula dietetico utilizzando una siringa e collocarlo in una fiala di ml 4 di vetro. Registrare il peso dell'olio di pesce.
   2. la dissoluzione del campione
      1. Sciogliere circa 120 ml di olio di pesce in 500 ml di CDCl _3, contenente 0,01% di tetrametilsilano (TMS) che viene utilizzato come riferimento per il ¹ H e ¹³ C spostamenti chimici.
         NOTA: TMS è l'usod solo per la taratura spostamento chimico (vedi numeri di passo 2.2.1.2.7 e 2.2.2.2.7), non per la quantificazione (vedi numeri di passo 2.2.1.3 e 2.2.2.3) scopi.
      2. Preparare un 2,6-di- terz-butil-4-metilfenolo (BHT) soluzione madre, se quantificazione espresso in mg / g è desiderato, sciogliendo circa 220 mg di BHT e 15 mg di cromo (III) acetilacetonato (Cr ( acac) ₃₎ in 20 mL di CDCl ₃ contenente 0,01% di TMS. Utilizzare 500 microlitri della soluzione madre di sciogliere 100 mg (± 10 mg) di olio di pesce.
   3. Dopo dissoluzione dell'olio (richiede alcuni secondi), trasferire tutta la soluzione direttamente in una elevata qualità del tubo NMR 5 mm e allegare un tappo. Analizzare i campioni entro 24 ore dopo la preparazione dei campioni.

Preparazione 2. Strumento NMR

Nota: Attenzione, attenzione che la presenza di forti campi magnetici prodotti da strumenti NMR può influenzare i dispositivi medici e implformiche come pacemaker e protesi chirurgiche, così come gli elementi elettronici come carte di credito, orologi, ecc È necessario Ulteriore cautela quando l'analisi viene eseguita utilizzando magneti non schermatura. Due strumenti NMR sono stati utilizzati per l'acquisizione di ¹ H e ¹³ C NMR; uno spettrometro operante a 850,23 MHz e 213.81 MHz per ¹ H e ¹³ C nuclei, rispettivamente, dotato di un'inversa tripla risonanza elio-raffreddata (TCI) sonda 5 mm e uno spettrometro operante a 500,20 MHz e 125.77 MHz per ¹ H e ¹³ C nuclei, rispettivamente, dotato di una larga fascia constatato (BBO) raffreddato con azoto sonda 5 mm. Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti a 25 ± 0,1 ° C e gli spettri sono stati elaborati da un pacchetto di dati NMR acquisizione e analisi dei software di elaborazione standard (vedi Lista dei materiali).

1. Preparazione per l'acquisizione del spettri NMR
   Nota: ¹ H e ¹³ C NMRpossono essere acquisite conseguenza senza rimuovere il campione dallo strumento.
   1. Inserire il tubo NMR in una turbina filatrice (vedi Materiali List).
   2. Posizionare il filatore e il tubo sulla sommità di un profondimetro graduato e spingere delicatamente la parte superiore del tubo fino alla parte inferiore tocchi il fondo della sagoma.
   3. Collocare il campione NMR in un luogo aperto del SampleCase. Si noti il ​​numero di slot del campione viene posto in.
   4. Per caricare il campione nel NMR, tornare al computer di controllo e digitare 'sx #', dove # è la fessura nel SampleCase tenendo il campione.
   5. Attendere che il segnale del deuterio di CDCl ₃ per apparire sullo schermo la finestra di blocco. Se non viene visualizzata automaticamente, digitare "lockdisp". Non appena il segnale di deuterio è visibile, tipo "lock" sulla linea di comando per selezionare "CDCl _3" dall'elenco del solvente, al fine di bloccare il campione utilizzando deuterio risonanza CDCl _3.
      NOTA: Deuterio signal non si può visualizzare se l'utente precedente usa un solvente diverso. L'utente deve attendere che l'indicatore che il campione è giù, quindi bloccare.
   6. Tipo "bsmsdisp" nella riga di comando per assicurarsi filatura non è attivo. Se il pulsante "SPIN" è verde, clic su di esso per disattivare filatura.
   7. Digitare il comando "nuovo" per creare un nuovo set di dati. Inserire un nome per il set di dati nella scheda "NAME" e il numero di esperimento nella scheda "EXPNO". Utilizzare il numero "1" nella scheda "PROCNO". Nella scheda "Experiment", clicca su "Seleziona" e scegliere il file di parametri "PROTON". Scrivere il titolo di questo esperimento nella scheda "TITLE". Fai clic su "OK".
   8. Tipo "getprosol" nella riga di comando per ottenere i parametri standard per la sonda NMR corrente e solvente.
   9. Ripetere passaggio 2.1.7 per ¹³ C, selezionare la sequenza di impulsi "C13IG" nella scheda "sperimentale" per la 1D ¹³ C inversa gated disaccoppiato esperimento.
   10. Tipo "getprosol" nella riga di comando per ottenere i parametri standard per la sonda NMR corrente e solvente.
   11. Digitare il comando "atma" per eseguire la sintonizzazione automatica e la congruenza della sonda per entrambi i nuclei di carbonio e protoni.
   12. Eseguire gradiente unidimensionale spessoramento per ottenere un campo magnetico molto omogenea, e quindi forma di linea ottimale per i segnali NMR.
       1. Utilizzare la procedura automatica standard per 1D spessoramento, semplicemente sequenzialmente eseguire i comandi "qu topshim 1dfast ss", "qu topshim tuneb ss," e "qu topshim rapporto" sulla linea di comando.
2. ottimizzazione dei parametri
   1. calibrazione impulso a 90 °
      1. Creare un nuovo set di dati per ¹ H (vedere i passi 2.1.7 e 2.1.8).
      2. Digitare il comando "paropt" sulla riga di comando per avviare il programma di automazione per la calibrazione del PUL 90 °SE. Selezionare durata dell'impulso, p1, come il parametro da modificare.
      3. Iniziamo con "2" ms come valore iniziale di p1, immettere "2" ms incrementi ed eseguire esperimenti "16".
      4. Creare un nuovo set di dati per ¹³ C (vedere fase 2.1.9) e ripetere il processo per ¹³ C nuclei (vedere i passi 2.2.1.2 e 2.2.1.3).
   2. T ₁ misura misurata con il metodo nullo ¹⁶ per ¹ H
      NOTA: Il metodo nullo utilizza la sequenza di impulsi inversion recovery, consistente in seguito a 180 ° impulso da un ritardo (tau), per consentire il rilassamento lungo l'asse z ed una finale di 90 ° impulso che crea la magnetizzazione trasversale osservabile.
      1. Creare un nuovo set di dati per ¹ H (vedere i passi 2.1.7 e 2.1.8).
      2. Tipo "PULPROG t1ir1d" per modificare la sequenza di impulsi per l'esperimento di inversione di recupero.
      3. Digitare i seguenti comandi sul command linea per impostare la larghezza spettrale in ppm, al centro del trasmettitore RF, il numero di scansioni del numero di dummy scan e il numero di punti di dati "SW 8", "O1P 3.8", "ns 2" ", ds 2" e "td 64K".
      4. Tipo "p1 (valore)" e inserire i valori di durata di impulso a 90 ° come determinato dalla taratura impulso (vedi punto 2.2.1) e tipo "p2 (valore)" per l'impulso 180 ° (il valore di durata per i 180 ° impulso è la durata dell'impulso di 90 ° moltiplicato per due).
      5. Impostare il ritardo di riciclo per un valore molto grande, come ad esempio 10 s digitando "d1 10".
      6. Impostare tau per un breve valore, ad esempio 10 ms, 10 ms digitando "d7" nella riga di comando.
      7. Impostare il guadagno del ricevitore (RG) ad un valore appropriato utilizzando il "rga" comando per il calcolo automatico del RG.
      8. Eseguire uno spettro digitando il comando "zg".
      9. Eseguire Fourier-trasformazione digitando "EFP"nella linea di comando.
      10. Eseguire la correzione di fase automatica digitando il comando "apk" nella linea di comando. Se le regolazioni di fase supplementari sono necessari per migliorare ulteriormente lo spettro, clicca sulla scheda "Processo", quindi fare clic sull'icona "Adjust Fase" per accedere alla modalità di correzione di fase.
          1. Utilizzare l'ordine zero (0) e icone primo ordine (1) rifasamento trascinando il mouse fino a quando tutti i segnali sono in modalità assorbimento negativo. Applicare e salvare i valori di correzione di fase facendo clic sul pulsante "Ritorno e Salva" per uscire dalla modalità di correzione di fase.
      11. Aumentare la tau finché tutti i picchi sono o positivi o annullato ripetendo le fasi 2.2.2.6-2.2.2.9. Per determinare il valore T _1, è sufficiente dividere il valore tau dove il picco viene reso nullo con ln2.
   3. T ₁ misura misurata con il metodo nullo ¹⁶ per ¹³ C
      1. Creare un nuovo set di dati per ¹³ C (vedi punto 2.1.9)
      2. Tipo "PULPROG t1irpg" per modificare la sequenza di impulsi all'esperimento inversione recupero per nuclei di carbonio.
      3. Digitare i seguenti comandi sulla riga comandi per impostare la larghezza spettrale in ppm, al centro del trasmettitore RF, il numero di scansioni, il numero di scansioni fittizi e il numero di punti dati: "sw 200", "O1P 98" , "NS 8", "ds 2" e "td 64K".
      4. Tipo "p1 (valore)" e inserire i valori di durata di impulso a 90 ° come determinato dalla taratura impulso (vedi punto 2.2.1) e "p2 (valore)" di tipo per l'impulso a 180 ° (il valore di durata è 90 ° durata dell'impulso moltiplicato per due).
      5. Impostare il ritardo di riciclo per un valore molto grande, come ad esempio 100 s digitando "d1 100".
      6. Set tau per un breve valore, ad esempio 100 ms digitando "100ms d7" nella riga di comando.
      7. Impostare il receivguadagno er (RG) ad un valore appropriato utilizzando il "rga" comando per il calcolo automatico del RG.
      8. Eseguire uno spettro digitando il comando "zg".
      9. Eseguire Fourier-trasformazione digitando "EFP" nella linea di comando.
      10. Eseguire la correzione automatica di fase digitando il comando "apk" nella riga di comando. Se le regolazioni di fase supplementari sono necessari per migliorare ulteriormente lo spettro, cliccare sull'icona "Adjust Fase" e le icone di correzione di fase per ordine zero (0) e la fase (1) la correzione del primo ordine.
          1. Mentre cliccando sulla ordine zero e di fase del primo ordine icone correzione, trascinare il mouse fino a quando tutti i segnali sono in modalità assorbimento negativo. Applicare e salvare i valori di correzione di fase facendo clic sul pulsante "Ritorno e Salva" per uscire dalla modalità di correzione di fase.
      11. Aumentare la tau finché tutti i picchi sono o positivi o annullato ripetendo le fasi 2.2.3.6-2.2.3.9. Determinareil valore T _1, è sufficiente dividere il valore tau dove il picco viene reso nullo con ln2.
3. Unidimensionale (1D) NMR Spectra
   1. ¹ H-NMR
      1. Acquisizione dei dati NMR
         1. Andare al set di dati ¹ H creato nel passaggio 2.1.7 e utilizzare il "pulse-acquisizione" sequenza di impulsi standard "zg", digitando "PULPROG zg" nella linea di comando.
         2. Digitare i seguenti comandi sulla riga comandi per impostare la larghezza spettrale in ppm, al centro del trasmettitore RF, il numero di scansioni, il numero di scansioni fittizi, il numero di punti di dati e la durata dell'impulso per un angolo di impulso a 90 ° : "sw 8", "O1P 3.8", "ns 2", "ds 2", "td 64K" e "P1 (come determinato mediante calibrazione impulsi)" (vedi punto 2.2.1).
            NOTA: i punti di dati 32K possono essere utilizzati per lo strumento a 500 MHz.
         3. Impostare un ritardo di rilassamento di 7 s per lo strumento a 500 MHz o 9 s per lo strumento 850 MHz digitando "7s D1" o "9s D1", rispettivamente nella riga di comando.
         4. Impostare il guadagno del ricevitore (RG) ad un valore appropriato utilizzando il "rga" comando per il calcolo automatico del RG.
         5. Tipo "baseopt digmod" di acquisire uno spettro con una migliore linea di base.
         6. Avviare l'acquisizione digitando il comando "ZG" pulse-acquisiscono nella linea di comando.
      2. Elaborazione dei dati NMR
         1. Tipo "si 64K" nella riga di comando per applicare zero riempimento e impostare la dimensione dello spettro reale 64K.
         2. Impostare la linea ampliare parametro a 0,3 Hz digitando "lb 0.3" nella riga di comando per applicare una funzione di ponderazione (decadimento esponenziale) con una linea ampliare fattore di 0,3 Hz prima trasformata di Fourier.
         3. Eseguire Fourier-trasformazione digitando "EFP" nel comandolinea.
         4. Eseguire la correzione automatica di fase digitando il comando "apk" nella riga di comando. Se le regolazioni di fase supplementari sono necessari per migliorare ulteriormente lo spettro, clicca sulla scheda "Processo", quindi fare clic sull'icona "Adjust Fase" e le icone di correzione di fase per ordine zero (0) e del primo ordine (1) correzione di fase .
            1. Mentre cliccando sulla ordine zero e di fase del primo ordine icone correzione, trascinare il mouse fino a quando tutti i segnali sono in modalità assorbimento positivo. Applicare e salvare i valori di correzione di fase facendo clic sul pulsante "Ritorno e Salva" per uscire dalla modalità di correzione di fase.
         5. Applicare una funzione del quarto ordine polinomiale per la correzione della linea di base sull'integrazione digitando il comando "abs n".
            NOTA: Questo assicura una linea di base spettrale piatta con una minima intensità.
         6. Spostamenti Relazione chimiche in ppm da TMS (δ = 0). Clicca sulla calibrazione ( ". Ax Calibè "icona), e posizionare il cursore con la linea rossa sulla parte superiore del segnale TMS NMR (picco più vicino a 0). click sinistro e digitare '0'.
      3. L'analisi dei dati NMR
         1. Integrare la regione spettrale da δ 1,1 a Æ 0,6 così come i picchi a δ 4.98, δ 5.05 e δ 5.81 utilizzando l'icona "Integra" (nella scheda "Processo") e il momento clou ( "Definisci nuova Regione") icona. Sinistro del mouse e trascinate attraverso gli integrali.
            NOTA: Se non v'è bisogno di concentrarsi su una regione, fare clic sull'icona evidenziazione per disattivare e click sinistro e trascinare il mouse per ingrandire la regione. Per regolare l'intensità di soglia, utilizzare il pulsante centrale del mouse, se necessario. Fare clic sull'icona clou di nuovo a fare la funzione di integrazione attiva, per poi passare a quello successivo picco.
            1. Normalizzare la somma degli integrali di cui sopra per 100 facendo clic destro sul valore integrale che appaionos sotto il segnale e selezionare "Normalizzare somma di integrali". Immettere il valore "100" nella casella e fare clic su "Ritorno e Salva" per uscire dalla modalità di integrazione.
         2. Quando si utilizza BHT come standard interno, integrare il picco a δ 6.98 e impostare il pari integrante della millimoli di BHT per 0,5 mL di soluzione madre.
         3. Integrare i picchi di interesse (vedi punto 2.3.1.3.1) estendentesi 10 Hz da ciascun lato del picco, quando possibile.
         4. Procedere per eseguire ¹³ C-NMR acquisizione ed elaborazione spettri in modo simile.
   2. ¹³ C-NMR spectra
      1. Acquisizione dei dati NMR
         1. Andare al set di dati ¹³ C e utilizzando inversa gated sequenza di impulsi disaccoppiato, "ZGig" digitando "PULPROG ZGig" nella linea di comando.
            NOTA: Per eseguire un esperimento di carbonio con il decou standard a banda largasequenza di impulsi PLED, tipo "PULPROG zgpg" nella linea di comando.
         2. Digitare i seguenti comandi sulla riga comandi per impostare la larghezza spettrale in ppm, al centro del trasmettitore RF, il numero di scansioni, il numero di scansioni fittizi, il numero di punti di dati e la durata dell'impulso per un angolo di impulso a 90 ° : "sw 200", "O1P 95", "ns 16" "ds 2", "td 64K" e "P1 (come determinato mediante calibrazione impulsi)" (vedi punto 2.2.1.4).
         3. Impostare un ritardo di rilassamento di 35 s per lo strumento a 500 MHz o 45 s per lo strumento 850 MHz digitando "35s D1" o "45s D1", rispettivamente nella riga di comando. Quando si utilizza BHT, ritardo di rilassamento dovrebbe essere di 50 s nello strumento a 500 MHz e 60 s nello strumento 850 MHz.
         4. Impostare il guadagno del ricevitore (RG) ad un valore appropriato utilizzando il "rga" comando per il calcolo automatico del RG.
         5. Tipo "baseopt digmod" nella riga di comando di acquisire uno spettro wesimo migliorata basale.
         6. Avviare l'acquisizione digitando il comando "ZG" pulse-acquisiscono nella linea di comando.
      2. Elaborazione dei dati NMR
         1. Tipo "si 64K" nella riga di comando per applicare zero riempimento e impostare la dimensione dello spettro reale 64K.
         2. Impostare la linea ampliare parametro a 1,0 Hz digitando "lb 1.0" nella riga di comando per applicare una funzione di ponderazione (decadimento esponenziale) con una linea ampliare fattore di 1,0 Hz prima trasformata di Fourier.
         3. Eseguire Fourier-trasformazione digitando "EFP" nella linea di comando.
         4. Eseguire la correzione automatica di fase digitando il comando "apk" nella riga di comando. Se le regolazioni di fase supplementari sono necessari per migliorare ulteriormente lo spettro, clicca sulla scheda "Processo", quindi fare clic sull'icona "Adjust Fase" e le icone di correzione di fase per ordine zero (0) e del primo ordine fase (1) Correzione .
            1. premendo sulla ordine zero e di correzione di fase del primo ordine icone, trascina il mouse finché tutti i segnali sono in modalità assorbimento positivo. Applicare e salvare i valori di correzione di fase facendo clic sul pulsante "Ritorno e Salva" per uscire dalla modalità di correzione di fase.
               NOTA: Per gli spettri di carbonio registrato su frequenza di Larmor di 214 MHz (lo strumento 850 MHz) la correzione degli errori dipendenti dalla frequenza (primo ordine) può essere impegnativo e richiede tempo per gli utenti meno esperti a causa delle grandi effetti off-risonanza del 90 ° impulso.
         5. Applicare una funzione del quarto ordine polinomiale per la correzione della linea di base sull'integrazione digitando il comando "abs n" nella riga di comando.
         6. Spostamenti Relazione chimiche in ppm da TMS (δ = 0). Clicca sulla calibrazione ( "Calib. Asse") l'icona, e posizionare il cursore con la linea rossa sulla parte superiore del segnale NMR a cui fare riferimento. Click sinistro e digitare "0".
      3. L'analisi dei dati NMR
         1. Integrare la regione spettrale da 175 a δ Æ 171 utilizzando l'icona "Integra" (nella scheda "Processo") e il momento clou ( "Definisci nuova Regione") icona. Sinistro del mouse e trascinate attraverso gli integrali.
            NOTA: Se non v'è bisogno di concentrarsi su una regione, fare clic sull'icona evidenziazione per disattivare e click sinistro e trascinare il mouse per ingrandire la regione. Fare clic sull'icona clou di nuovo a fare la funzione di integrazione attiva, per poi passare a quello successivo picco.
            1. Impostare l'integrale al 100 facendo un clic destro sul valore integrale che appare sotto il segnale e selezionare "Calibrare attuale Integrale". Immettere il valore "100" nella casella e fare clic su "Ritorno e salva" per uscire dalla modalità di integrazione.
         2. Quando si utilizza BHT come standard interno, integrare il picco a δ 151.45 e impostare il pari integrantele millimoli di BHT per 0,5 ml di soluzione di riserva.
         3. Integrare i picchi di interesse estendentesi 5 Hz da ciascun lato del picco (vedi punto 2.3.2.3.1).

Risultati

¹ H e ¹³ C NMR Gli spettri sono stati raccolti per olio di pesce integratori disponibili in commercio utilizzando due strumenti NMR; un 850 MHz e uno spettrometro a 500 MHz. Questi spettri possono essere utilizzati per la determinazione quantitativa di componenti di olio di pesce, come l'acido docosaesaenoico (DHA) e acido eicosapentaenoico (EPA), come pure altri composti come n -1 catene acile e importante indice nutrizionalmente come il n -6 ...

Discussione

Modifiche e strategie per la risoluzione

Qualità spettrale. La larghezza di riga del segnale NMR e quindi la risoluzione dello spettro NMR è fortemente dipendente spessoramento, che è un processo per l'ottimizzazione della omogeneità del campo magnetico. Per le analisi di routine, 1D spessoramento è adeguata e non è necessario uno spessoramento 3D, dato che essa è stata eseguita da personale NMR su base regolare. Se questo non è il caso, una spessoramento 3D deve es...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Avance III 850 NMR instrument	Bruker
Avance III 500 NMR instrument	Bruker
TCI 5mm probe	Bruker		Helium cooled inverse (proton deetected) NMR probe featuring three independent channels (1H, 13C, 15N)
BBO prodigy 5mm probe	Bruker		Nitrogen cooled observe (X-nuclei detected) probe, featuring two channels; one for 1H and 19F detectionand one for X-nuclei (covering from 15N to 31P)
Spinner turbin	Bruker		NMR spinners are made by polymer materials and they have a rubber o-ring to hold the NMR tube securely in place
Topspin 3.5	Bruker
deuterated chloroform	Sigma-Aldrich	865-49-6	99.8 atom % D, contains 0.03 TMS
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,	Sigma-Aldrich	128-37-0	purity >99%
Fish oil samples
NMR tubes	New Era	NE-RG5-7	5mm OD Routine “R” Series NMR Sample Tube
BSMS	Bruker		Bruker Systems Management System; control system device