생선 기름 보충제의 지질 프로필의 신속한 평가를위한 강력한 도구로 NMR 분광학

요약

여기서, 고해상도 ¹ H, ¹³ C 핵 자기 공명 (NMR) 분광법은 캡슐화 어유 보충제의 정성 및 정량 분석을위한 신속하고 신뢰할 수있는 도구로서 사용되었다.

초록

서쪽 다이어트 때문에 생선 기름 보충제의 섭취가 이러한 필수 영양소의 섭취를 증가하는 것이 좋습니다, n은 -3 지방산에 좋지 않습니다. 이 연구의 목적은 고해상도 ¹ H NMR 및 두 개의 다른기구를 이용하여 ¹³ C NMR 스펙트럼을 사용하여 캡슐화 어유 보충제의 정성 및 정량 분석을 설명한다; 500 MHz와 850 MHz의 악기. 양자 모두 ⁽¹ H)와 탄소 (C ¹³⁾ NMR 스펙트럼 어유 보충제의 주요 성분의 정량에 이용 될 수있다. 어유 보충제의 지질 정량 관련 1D 스펙트럼에서 해당 NMR 신호의 통합을 통해 달성된다. ¹ H, ¹³ C NMR에 의해 얻어진 결과는 두 핵 두 기기 사이의 해상도와 감도의 차이에도 불구하고, 서로 잘 일치한다. ¹ H NMR 쿠폰스펙트럼 1 시간 10 분간 지속에서 ^{13 개} C NMR 분석 달리 1 분 미만에 기록 될 수있는 SA보다 신속한 분석은, ¹³ C NMR 비교. ¹³ C NMR 스펙트럼은, 그러나, 더 유익하다. 그것은 개인 지방산의 더 많은 양이 많은 데이터를 제공 할 수 있고, 글리세린 골격에 지방산의 위치 분포를 결정하기 위해 사용될 수있다. 두 핵은 정제 또는 분리 단계의 필요없이 하나의 실험에 정량적 인 정보를 제공 할 수 있습니다. 자기장의 세기가 거의 인해 ¹³ C NMR에 대하여 그 하부 해상도로 ¹ H의 NMR 스펙트럼에 영향을 미치는, 그러나, 더 낮은 비용 NMR 장비 효율적 식품 산업 및 품질 관리 연구소에 의한 표준 방식으로 적용될 수있다.

서문

다이어트 N -3 지방산의 섭취는 심장 질환 ^{1, 2, 3, 4} 및 염증 질환, 당뇨병 ^(5)와 같은 여러 조건에 대해 유익한 것으로 입증되었다. 서양 다이어트를 n -3 지방산 가난한 간주되며, 따라서 생선 기름 보충제의 소비가 N을 개선하는 것이 좋습니다 10-6 / N -3 소비자의 영양 ¹ 균형. 생선 오일 보충 소비 최근의 증가에도 불구하고, 질문이 일부 제품의 안전성, 신뢰성 및 품질에 대해 남아있다. 생선 기름 보충제의 신속하고 정확한 성분 분석이 제대로이 상용 제품의 품질을 평가하고 소비자의 안전을 보장하기 위해 필수적이다.

생선 오일 보충의 평가를위한 가장 일반적인 방법S는 가스 크로마토 그래피 (GC) 및 적외선 분광법 (IR)이다. 이들은 매우 민감한 방법이지만, 그들은 몇 가지 단점 ^6에서 고통 받고 있습니다. GC 분석은 개개의 화합물의 분리 및 유도체 ⁷ 요구되며 지질 산화가 분석 ^8,9 중에 발생할 수 있기 때문에 시간 소모적 (4-8 시간)이다. IR 분광법은 정량적 일 수 있지만, 예측 모델은 IR 대역은 단일 화합물 ^(10)에 기인 할 수있는 예외가 있지만, 부분 최소 제곱 회귀 (PLSR)를 이용하여 구성 될 필요가있다. PLSR는 분석 ¹¹ 시간을 증가 샘플들의 다수의 분석을 요구한다. 이러한 이유로, 생선 기름 샘플의 많은 수의 정확하고 빠른 분석을 수 있도록 새로운 분석 방법의 개발에 대한 관심이 높아지고있다. 같은 작정으로 조직건강 (NIH)과 식품의 약국 (FDA)의 국립 연구소에서 천연 보조제 (ODS)의 CE는 이러한 새로운 방법 ^{(12), (13)을} 개발하기 위해 공식 분석 화학자 협회 (AOAC)와 협력했다.

스크리닝 및 영양 보조제와 같은 다 성분 행렬의 평가를위한 가장 유망한 분석 방법 중 하나는, 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼 ^{(14) (15)이다.} NMR 스펙트럼은 몇 가지 장점을 갖는다 : 그것은 비파괴 양적 기술은, 그것이없는 샘플 준비에 필요 최소한이며, 우수한 정확도 및 재현성을 특징으로한다. 이 용매의 소량을 사용하기 때문에 또한, NMR 분광법은 환경 친화적 인 방법입니다. NMR 분광법의 주요 단점은 다른 analyti에 비해 상대적으로 낮은 감도CAL 방법은, 그러나, 강력한 자기장, 다양한 직경의 극저온 프로브 향상된 데이터 처리하고 다양한 펄스 시퀀스와 같은 기술 장비의 최근 기술의 발전은 나노 미터 범위까지 감도가 증가하고있다. NMR 계측은 높은 비용이지만, NMR 분광계의 긴 수명 및 NMR의 많은 응용 프로그램이 장기적으로 분석의 비용을 절감. 상세한 영상 프로토콜 필드에 새로운 실무자 ¹ H 및 어유 보충제 ^{13 개} C NMR 분광 분석과 관련된 함정을 방지하기위한 것이다.

프로토콜

1. NMR 샘플 제조

참고 :주의, 사용하기 전에 모든 관련 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하시기 바랍니다. 샘플 제조에 사용되는 중수 소화 클로로포름 _{(CDCl3 중)의} 독성이다. 흄 후드 및 개인 보호 장비의 사용을 포함 샘플 준비를 수행 할 때 모든 적절한 안전 관행을 사용하십시오 (보안경, 장갑, 실험실 코트, 전체 길이 바지, 신발 - 발가락을 휴관).

1. ¹ H, ^{13 개} C 샘플의 제조
   1. 주사기를 사용하여 캡슐로부터식이 어유 120 μL (~ 110 mg)을 추출하고, 4 mL 유리 바이알에 배치. 생선 기름의 무게를 기록한다.
   2. 샘플 용해
      1. ¹ H, ^{13 개} C의 화학적 이동에 대한 기준으로서 사용되는 테트라 메틸 실란 (TMS) 0.01 %를 함유하는 _CDCl3 중 500 μL 생선 기름 약 120 μL 녹인다.
         참고 : TMS가 사용하는 것입니다화학 시프트 만 교정 (스텝 번호 2.2.1.2.7 및 2.2.2.2.7 참조) D, 목적하지 부량 (단계 번호 2.2.1.3 및 2.2.2.3 참조).
      2. 정량 ㎎을 표현하는 경우, 2,6- 디 - 부틸 -4- 메틸 페놀을 제조 (BHT) 원액 / g는 ((CR을 BHT 약 220 mg의 크롬 (III) 아세틸 아세토 네이트 15 mg을 용해시킴으로써, 요구되는 ACAC) ₃₎ 0.01 % TMS 함유 _CDCl3 중의 20 ㎖이다. 생선 기름의 100 mg의 (± 10 mg)을 용해 원액 500 μL를 사용합니다.
   3. 오일 (몇 초 정도)에 용해 후, 직접 고품질 5 mm의 NMR 튜브에 상기 용액을 모두 전송하고 캡을 부착. 샘플 제조 후 24 시간 이내에 샘플을 분석한다.

2. NMR 장비 준비

참고 :주의, NMR 장비에 의해 생성 된 강한 자기장의 존재는 의료 기기 및 IMPL에 영향을 미칠 수 있음을 조심맥박 조정기 수술 보철,뿐만 아니라 신용 카드, 시계 등의 분석이 비 차폐 자석을 사용하여 수행 할 때 추가로주의가 필요합니다 같은 전자 항목으로 개미. 두 NMR 기기 ¹ H, ¹³ C NMR 스펙트럼의 취득에 사용 하였다; 삼중 공명 헬륨 냉각 역 (TCI) 5mm 프로브 및 500.20 MHz의 ¹ H, ¹³ C에 대한 125.77 MHz로 동작하는 분석기를 구비 850.23 MHz 및 각각 ¹ H, ^{13 개} C 핵에 대한 213.81 MHz에서 작동하는 분광계 핵은 각각 관찰 광대역 장착 (BBO) 5mm 프로브 질소 냉각시켰다. 모든 실험은 25 ± 0.1 ºC에서 수행하고, 스펙트럼 표준 NMR 분석 데이터 수집 및 처리 소프트웨어 패키지에 의해 처리 된 (자재 목록 참조).

1. NMR의 스펙트럼을 획득하기위한 준비
   주 : ¹ H, ¹³ C NMR 스펙트럼악기에서 샘플을 제거하지 않고 결과적으로 얻을 수있다.
   1. 스피너 터빈에 NMR 튜브를 삽입 (재료 목록 참조).
   2. 회 전자 및 그레이드 깊이 게이지의 상부에 관을 삽입하고 그 하부는 게이지의 바닥에 닿을 때까지 조심스럽게 튜브의 상부를 누른다.
   3. SampleCase의 개방하다고 NMR 샘플을 놓는다. 샘플이 배치되는 슬롯 번호를 참고.
   4. NMR의에서 샘플을로드하려면 #이 샘플을 들고 SampleCase의 슬롯 인 제어 컴퓨터 입력 'SX #'로 돌아갑니다.
   5. 잠금 윈도우 화면에 _{표시을 CDCl3의} 중수소 신호를 기다립니다. 자동 입력 "lockdisp"를 표시하지 않습니다. 즉시 중수소 신호가 보이는 바와 같이, 입력 명령 행의 "잠금"및 _CDCl3 중 중수소 공진을 이용하여 시료를 고정하기 용매의 목록에서 _{"CDCl3 중"을} 선택한다.
      참고 : 중수소의이전에 사용자가 다른 용매를 사용한 경우 ignal 나타나지 않을 수있다. 사용자는 샘플 다운 지표 대기해야하고 잠급니다.
   6. 회전을 보장하기 위해 명령 줄을 입력 "bsmsdisp"는 활성화되지 않습니다. 은 "SPIN"버튼이 녹색이면 회전을 비활성화를 클릭합니다.
   7. 새로운 데이터 세트를 생성하기 위해 "새로운"명령을 입력합니다. "이름"탭과 "EXPNO"탭에서 실험 수의 데이터 세트의 이름을 입력합니다. 은 "PROCNO"탭에 숫자 "1"을 사용합니다. '실험'탭에서 충돌 "을 선택"과 "PROTON"매개 변수 파일을 선택합니다. 은 "TITLE"탭에서 실험의 제목을 작성합니다. "OK"를 클릭하십시오.
   8. 현재 NMR 프로브와 용매의 표준 파라미터를 획득하기 위해 상기 명령 라인에서 "getprosol"를 입력.
   9. 1 차원 C ¹³ g 역행렬은 "실험"탭에서 "C13IG"펄스 시퀀스를 선택 C ¹³ 단계를 반복 2.1.7,ated에 실험을 분리.
   10. 현재 NMR 프로브와 용매의 표준 파라미터를 획득하기 위해 상기 명령 라인에서 "getprosol"를 입력.
   11. 모두 탄소와 수소 이온 핵에 대한 자동 튜닝 및 프로브의 매칭을 수행 할 명령 "ATMA"를 입력합니다.
   12. NMR의 신호들에 대해 매우 균일 한 자기장을 달성 shimming 일차원 구배, 따라서 최적의 광고 형상을 수행한다.
       1. 단순히 순차적으로 실행하여, 1 차원 shimming에 대한 표준 자동 절차를 사용하여 명령 "한때 topshim 1dfast SS", "숨어 topshim tuneb의 SS,"명령 줄에서 "한때 topshim 보고서".
2. 매개 변수 최적화
   1. 90 ° 펄스 보정
      1. ¹ H (단계 2.1.7 및 2.1.8 참조)를위한 새로운 데이터 세트를 생성한다.
      2. 90 ° PUL을 교정하기위한 자동화 프로그램을 시작하려면 명령 줄에서 명령 "paropt"를 입력그 자체. 변경 될 수있는 매개 변수로 선택 펄스 지속 시간, P1,.
      3. "2"및 μs의 단위를 "16"실험을 수행 입력 (P1)의 초기 값으로 "2"로 시작 μS.
      4. ¹³ C를위한 새로운 데이터 세트를 생성한다 (단계 2.1.9 참조), C ^{(13 개)의} 핵 (단계 2.2.1.2 및 2.2.1.3 참조)에 대한 프로세스를 반복한다.
   2. ¹ 시간 동안 널 방법 ^(16)에 의해 측정 _한 측정 T
      주 : 널있어서 z 축과 관측 횡단 자화를 생성하는 최종 90 ° 펄스 따라 완화 할 수 있도록, 지연 (타우)이 180 ° 펄스에 후속 구성된 반전 복구 펄스 시퀀스를 이용한다.
      1. ¹ H (단계 2.1.7 및 2.1.8 참조)를위한 새로운 데이터 세트를 생성한다.
      2. 반전 복구 실험 펄스 순서를 변경하려면 "pulprog의 t1ir1d"를 입력합니다.
      3. 령 어에서 다음 명령을 입력D 라인 PPM의 스펙트럼 폭은 RF 송신기의 중심 스캔 더미 스캔의 수와 데이터 요소 "SW 8"의 숫자 "o1p 3.8", "NS 2", "DS의 개수를 설정하는 2 "와"TD의 64K ".
      4. 유형 "P1 (값)"펄스 보정에 의해 결정된 90 ° 펄스 지속 시간 값을 입력한다 (단계 2.2.1 참조), (180 ° 펄스 "P2 (값)의"180에 대한 시간 값을 입력 펄스는 두 곱한 90 ° 펄스 지속 시간)이다.
      5. "D1 10"을 입력하면, 매우 큰 값을 예컨대 10 초를 재순환 지연 시간을 설정한다.
      6. 커맨드 라인에 "10ms의 D7"을 입력하여, 짧은 값 등을 MS (10) 타우를 설정한다.
      7. RG 자동 계산을위한 명령 'RGA "를 사용하여 적절한 값으로 상기 수신기의 이득 (RG)를 설정한다.
      8. 명령 "ZG"를 입력하여 스펙트럼을 실행합니다.
      9. "EFP"를 입력하여 푸리에 변환을 실행하여명령 줄입니다.
      10. 명령 줄에서 명령 "APK"를 입력하여 자동 위상 보정을 수행합니다. 추가 위상 조정이 더 스펙트럼을 개선 클릭해야하는 경우 "프로세스 탭,"다음 위상 보정 모드를 입력하려면 "단계를 조정"아이콘을 클릭합니다.
          1. 모든 신호가 음 흡수 모드에있을 때까지 마우스를 드래그하여 영차 (0)과 제 차 (1)의 위상 보정 아이콘을 사용한다. 적용 및 위상 보정 모드를 종료하려면 "복귀 및 저장"버튼을 클릭하여 위상 보정 값을 저장합니다.
      11. 모든 피크는 단계를 반복하여 긍정적이거나으로 널 중 하나가 될 때까지 타우을 증가 2.2.2.6-2.2.2.9. T 개의 _1의 값을 결정하기 위해, 단지 피크로 LN2 널링 된 타우 값을 나눈다.
   3. C ^(13)에 대해 널 방법 ^(16)에 의해 측정 _한 측정 T
      1. ¹³ C를위한 새로운 데이터 세트를 생성한다 (단계 2.1.9 참조)
      2. 유형 "pulprog의 t1irpg는"탄소 핵의 반전 복구 실험에 펄스 시퀀스를 변경합니다.
      3. "SW (200)", "o1p 98"(PPM)의 스펙트럼 폭을 상기 RF 송신기의 중심 스캔 횟수 더미 스캔의 수와 데이터 요소의 수를 설정하는 명령 행에서 다음 명령을 입력 "NS 8", "DS 2"및 "TD를 64K".
      4. 유형 "P1 (값)"펄스 보정에 의해 결정된 90 ° 펄스 지속 시간 값을 입력은 상기 180 ° 펄스 형 "P2 (값)"(시간 값은 90이다 (단계 2.2.1 참조) 두 곱 펄스 지속 시간).
      5. "D1 (100)"를 입력하여, 매우 큰 값으로 같은 100 개 (S)를 재순환 지연 시간을 설정한다.
      6. 짧은 값으로 설정 타우, 커맨드 라인에 "100ms의 D7"를 입력하여 같은 MS (100).
      7. 수신부 설정RG 자동 계산을위한 명령 'RGA "를 사용하여 적절한 값으로 어 게인 (RG).
      8. 명령 "ZG"를 입력하여 스펙트럼을 실행합니다.
      9. 명령 라인에서 "EFP"를 입력하여 푸리에 변환을 실행한다.
      10. 명령 줄에서 명령 "APK"를 입력하여 자동 위상 보정을 수행합니다. 추가적인 위상 조정은 상기 스펙트럼을 향상시키기 위해 필요한 경우, "위상을 조정"아이콘 영차 (0)와 일차 동상 (1) 보정을위한 위상 보정 아이콘을 클릭한다.
          1. 영차 및 일차 위상 보정 아이콘을 클릭 한 상태에서 모든 신호가 음 흡수 모드에있을 때까지 마우스를 드래그. 적용 및 위상 보정 모드를 종료하려면 "복귀 및 저장"버튼을 클릭하여 위상 보정 값을 저장합니다.
      11. 모든 피크는 단계를 반복하여 긍정적이거나으로 널 중 하나가 될 때까지 타우을 증가 2.2.3.6-2.2.3.9. 결정T 개의 _1의 값은 단순히 피크 LN2에 널링 된 타우 값을 나눈다.
3. 일차원 (1D) NMR 스펙트럼
   1. ¹ H-NMR 스펙트럼
      1. NMR의 데이터 취득
         1. 단계 2.1.7에서 생성 ^한 H 데이터 세트로 이동하고, 명령 라인에서 "pulprog ZG"을 입력하여 표준 "펄스 획득"펄스 시퀀스 "ZG"를 사용한다.
         2. 90 ° 펄스 각도 PPM의 스펙트럼 폭은 RF 송신기의 중심 스캔 횟수 더미 스캔의 수가 데이터 요소의 수 및 펄스 지속 시간을 설정하는 명령 행에서 다음 명령을 입력 "SW 8", "o1p 3.8", "NS 2", "DS 2", "TD를 64K"및 "(펄스 보정에 의해 결정) P1 '(단계 2.2.1 참조).
            참고 : 32K 데이터 포인트가 500 MHz의 기기에 사용할 수 있습니다.
         3. 커맨드 라인에서 각각 "D1의 7S '또는'D1 9S"를 입력하면 850 ㎒ 악기 500 MHz의 악기들 7 또는 9 초의 이완 지연 시간을 설정한다.
         4. RG 자동 계산을위한 명령 'RGA "를 사용하여 적절한 값으로 상기 수신기의 이득 (RG)를 설정한다.
         5. 향상된베이스 라인과 스펙트럼을 얻기 위해 "digmod baseopt"를 입력합니다.
         6. 명령 행에서 펄스 획득 명령 "ZG"를 입력하여 인수를 시작합니다.
      2. NMR의 데이터 처리
         1. 제로 충전을 적용하고 64K로 실제 ​​스펙트럼의 크기를 설정하는 명령 줄에서 "시의 64 K"를 입력합니다.
         2. 라인 푸리에 변환 전에 0.3 Hz에서의 계수를 확대하여 가중 함수 (지수 형 감쇠)을 적용하는 명령 라인에서 "LB 0.3"를 입력하여 0.3 Hz로 파라미터를 확대 라인을 설정한다.
         3. 명령에 "EFP"를 입력하여 푸리에 변환을 실행하여선.
         4. 명령 줄에서 명령 "APK"를 입력하여 자동 위상 보정을 수행합니다. 추가 위상 조정이 더 스펙트럼을 개선 클릭해야하는 경우 "프로세스 탭,"다음 "단계를 조정"아이콘을 제로 순서 (0)와 일차 (1) 위상 보정을위한 위상 보정 아이콘을 클릭 .
            1. 영차 및 일차 위상 보정 아이콘을 클릭 한 상태에서 모든 신호가 긍정적 흡수 모드에있을 때까지 마우스를 드래그. 적용 및 위상 보정 모드를 종료하려면 "복귀 및 저장"버튼을 클릭하여 위상 보정 값을 저장합니다.
         5. 명령 "복근 n"을 입력하여 통합시베이스 라인 보정에 대한 4 차 다항식 함수를 적용한다.
            참고 :이 최소 강도 평평한 스펙트럼 기준을 보장합니다.
         6. TMS에서 PPM의 보고서 화학적 이동 (δ = 0). 교정을 클릭합니다 ( "CALIB. 도끼"") 아이콘이 0에 가장 가까운 피크 TMS NMR 신호 ()의 상단에 빨간색 선으로 커서를 놓습니다. 왼쪽 버튼으로 클릭하고 입력 "0을.
      3. NMR 데이터 분석
         1. 은 "통합"아이콘 ( "프로세스"탭)과 하이라이트를 사용하여 5.05 및 δ 5.81 δ, δ 4.98에서의 피크뿐만 아니라 0.6 δ 1.1 δ에서 아이콘 ( "새로운 영역을 정의") 스펙트럼 영역을 통합. 적분을 통해 클릭과 드래그를 떠났다.
            참고 : 비활성화하고 마우스 왼쪽 버튼을 클릭하고 지역을 확대하기 위해 마우스를 드래그 하이라이트 아이콘을 클릭 영역에 초점을 맞출 필요가있는 경우. 필요한 경우 임계 강도를 조정하려면 마우스 가운데 버튼을 사용합니다. 다음, 통합 기능이 활성화 다음 피크로 이동 다시 강조 표시 아이콘을 클릭합니다.
            1. 나타나는 적분 값에 마우스 오른쪽 버튼을 클릭 (100), 상기 적분 값의 합계를 정규화아래의 신호와는 "적분 값의 합계를 정규화"를 선택한다. 입력 상자에 값 "100"과는 통합 모드를 종료하려면 "복귀 및 저장"을 클릭합니다.
         2. 내부 표준 물질로서 BHT를 사용하는 경우, δ 6.98에서의 피크를 통합하고 원액 0.5 mL의 BHT의 밀리몰 적분 동일한 세트.
         3. 관심 피크 통합 가능하면 피크의 각 측면에서 10 Hz로 연장한다 (단계 2.3.1.3.1 참조).
         4. 유사한 방식으로 ¹³ C-NMR 스펙트럼을 수집 및 처리를 수행하도록 진행.
   2. ¹³ C-NMR 스펙트럼
      1. NMR의 데이터 취득
         1. ¹³ C 데이터 세트로 이동하고, 명령 라인에서 "pulprog zgig"를 입력하여 역 분리 게이트 펄스 시퀀스 "zgig"를 사용한다.
            참고 : 표준 광대역 decou와 탄소 실험을 실행하려면PLED 펄스 시퀀스, 명령 라인에 입력 "pulprog zgpg".
         2. 90 ° 펄스 각도 PPM의 스펙트럼 폭은 RF 송신기의 중심 스캔 횟수 더미 스캔의 수가 데이터 요소의 수 및 펄스 지속 시간을 설정하는 명령 행에서 다음 명령을 입력 "SW (200)", "o1p의 95", "16 NS", "DS 2", "TD를 64K"및 "(펄스 보정에 의해 결정) P1 '(단계 2.2.1.4 참조).
         3. 커맨드 라인에서 각각 "D1의 35S"또는 "D1 45S"를 입력하면 850 ㎒ 악기 500 MHz의 악기들 35 또는 45 초의 이완 지연 시간을 설정한다. BHT를 사용하는 경우, 이완 지연은 500 MHz의 악기들 50 및 850 ㎒ 악기에서 60 초이어야한다.
         4. RG 자동 계산을위한 명령 'RGA "를 사용하여 적절한 값으로 상기 수신기의 이득 (RG)를 설정한다.
         5. 승 스펙트럼을 얻기 위해 명령 줄에서 "digmod baseopt"를 입력i 번째 개선 기준선.
         6. 명령 행에서 펄스 획득 명령 "ZG"를 입력하여 인수를 시작합니다.
      2. NMR의 데이터 처리
         1. 제로 충전을 적용하고 64K로 실제 ​​스펙트럼의 크기를 설정하는 명령 줄에서 "시의 64 K"를 입력합니다.
         2. 라인 푸리에 변환 전에 1.0 Hz에서의 계수를 확대하여 가중 함수 (지수 형 감쇠)을 적용하는 명령 라인에서 "LB 1.0"를 입력하여 1.0 Hz로 파라미터를 확대 라인을 설정한다.
         3. 명령 라인에서 "EFP"를 입력하여 푸리에 변환을 실행한다.
         4. 명령 줄에서 명령 "APK"를 입력하여 자동 위상 보정을 수행합니다. 추가 위상 조정이 더 스펙트럼을 개선 클릭해야하는 경우 "프로세스 탭,"다음 "단계를 조정"아이콘을 제로 순서 (0)와 일차 단계 (1) 교정을위한 위상 보정 아이콘을 클릭 .
            는 영차 및 일차 위상 보정 아이콘을 클릭하는 동안, 마우스를 드래그. 적용 및 위상 보정 모드를 종료하려면 "복귀 및 저장"버튼을 클릭하여 위상 보정 값을 저장합니다.
            주 : 탄소 스펙트럼은 214 메가 헤르츠 (850 MHz의 구) (제 1 차) 주파수 의존성 오류 정정 라모 주파수에 기록 된 내용은 어려울 수 시간 인해의 대형 오프 - 공진 효과 덜 숙련 된 사용자에 대한 소모적 90 ° 펄스.
         5. 커맨드 라인에서 명령 "복근 n"을 입력하여 통합시베이스 라인 보정에 대한 4 차 다항식 함수를 적용한다.
         6. TMS에서 PPM의 보고서 화학적 이동 (δ = 0). 교정 ( "CALIB. 축") 아이콘을 클릭하고 참조 할 수있는 NMR 신호의 상단에 빨간색 선으로 커서를 놓습니다. "0"에서 왼쪽 클릭 입력합니다.
      3. NMR 데이터 분석
         1. ( "프로세스"탭 아래) "통합"아이콘을 강조 표시를 사용하여 171 δ하는 175 δ에서 아이콘 ( "새로운 영역을 정의") 스펙트럼 영역을 통합 할 수 있습니다. 적분을 통해 클릭과 드래그를 떠났다.
            참고 : 비활성화하고 마우스 왼쪽 버튼을 클릭하고 지역을 확대하기 위해 마우스를 드래그 하이라이트 아이콘을 클릭 영역에 초점을 맞출 필요가있는 경우. 다음, 통합 기능이 활성화 다음 피크로 이동 다시 강조 표시 아이콘을 클릭합니다.
            1. 신호 아래에 나타납니다 적분 값에 마우스 오른쪽 버튼을 클릭을 수행하여 100 적분을 설정하고 "일체형 현재 보정"을 선택합니다. 입력 상자에 값 "100"하고는 "반환을 저장"을 클릭 통합 모드를 종료합니다.
         2. 내부 표준 물질로서 BHT를 사용하는 경우, δ 151.45에서 피크를 통합하고, 통합에 동일한 설정원액 0.5 mL의 BHT의 밀리몰.
         3. 피크의 각 측면에서 연장되는 5 Hz에서 관심 피크를 통합한다 (단계 2.3.2.3.1 참조).

결과

¹ H, ¹³ C NMR 스펙트럼은 두 NMR 장비를 이용하여 시판 어유 보충제 회수하고; 850 MHz와 500 MHz의 분석 장치. 이러한 스펙트럼은 이러한 도코 사 헥사 엔 산 (DHA) 및 에이코 사 펜타 엔 산 (EPA), 예컨대 N과 같은 N -1 아실 체인 및 영양 중요한 지표뿐만 아니라 다른 화합물 생선 기름 성분의 정량에 이용 될 수 -6 / N 비 -3. 정량 심지어 내부 표준을...

토론

문제 해결에 대한 수정 및 전략

스펙트럼 품질. NMR의 신호에 따라서 NMR 스펙트럼 해상도의 선폭은 자기장의 균일 성을 최적화하는 처리 인 shimming에 크게 의존한다. 일상적인 분석을 위해, 1 차원 shimming 적절한 차원이고 shimming는 그것을 정기적 NMR 요원에 의해 수행되는 것을 고려할 필요는 없다. O (90:10) ₂ D : 그렇지 않은 경우, 3 차원 shimming는 H ₂ O 0....

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Avance III 850 NMR instrument	Bruker
Avance III 500 NMR instrument	Bruker
TCI 5mm probe	Bruker		Helium cooled inverse (proton deetected) NMR probe featuring three independent channels (1H, 13C, 15N)
BBO prodigy 5mm probe	Bruker		Nitrogen cooled observe (X-nuclei detected) probe, featuring two channels; one for 1H and 19F detectionand one for X-nuclei (covering from 15N to 31P)
Spinner turbin	Bruker		NMR spinners are made by polymer materials and they have a rubber o-ring to hold the NMR tube securely in place
Topspin 3.5	Bruker
deuterated chloroform	Sigma-Aldrich	865-49-6	99.8 atom % D, contains 0.03 TMS
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,	Sigma-Aldrich	128-37-0	purity >99%
Fish oil samples
NMR tubes	New Era	NE-RG5-7	5mm OD Routine “R” Series NMR Sample Tube
BSMS	Bruker		Bruker Systems Management System; control system device