Caractérisation de sickling pendant la désoxygénation automatisée contrôlée avec l'ektacytométrie de gradient d'oxygène

Dans la drépanocytose (SCD), une mutation ponctuelle unique dans le codage génétique de la bêta-globine provoque la production d'hémoglobine anormale S (HbS). Une fois désoxygéné, HbS peut polymériser, formant des tiges rigides d'hémoglobine, ayant pour résultat le faucillage des globules rouges (RBCs). Ces RBCs faucillés ont sensiblement réduit la déformabilité, causant la vaso-occlusion, qui mène à de nombreuses complications cliniques SCD-connexes, y compris la douleur, la course, et des dommages d'organe. La déformation de RBC est également réduite par la déshydratation de RBC, ce qui entraîne des globules rouges denses qui sont plus susceptibles de faucille. À ce jour, il n'existe pas un seul test de laboratoire largement disponible, rapide et reproductible capable de prédire la gravité de la maladie ou de surveiller directement les effets du traitement des nouvelles thérapies induisantes par l'hémoglobine non fœtale. Dans cette étude, nous décrivons un protocole pour mesurer la déformation de RBC en fonction du pO₂ qui tient compte de la quantitation du comportement de faucillage dans les patients de SCD. L'ektacytométrie de gradient d'oxygène mesure la déformation de RBC, exprimée comme l'indice d'allongement (IE), en fonction du pO₂. Les RBC sont exposés à un stress de cisaillement fixe de 30 Pa au cours d'une série de désoxygénation et de réoxygénation. Six paramètres de lecture sont produits. Parmi ceux-ci, le point de faucille (PoS), défini comme le pO₂ à laquelle l'IE maximale (EI_max) montre une diminution de 5 %, et l'ie chômage minimum pendant la désoxygénation (EI_min) sont les plus instructifs, reflétant le pO₂ d'un patient individuel à laquelle la dilération commence et la déformation minimale des globules rouges d'un patient, respectivement. Le PoS est associé à l'affinité d'hémoglobine d'un patient individuel pour l'oxygène, tandis que le_min d'Ie montre une forte corrélation avec des niveaux foetaux d'hémoglobine. Nous concluons que l'ektacytométrie de gradient d'oxygène est une technique prometteuse pour surveiller le traitement des patients présentant SCD, comme biomarqueur pour des agents anti-sickling dans les essais cliniques et précliniques, et un outil important pour étudier le comportement de faucillement des RBCs de personnes atteintes de DSP et de drépanocytose.